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Tob蛋白質によるCCR4-NOT脱アデニル化酵素複合体の形成と機能の制御

公募研究

研究領域細胞シグナリング複合体によるシグナル検知・伝達・応答の構造的基礎
研究課題/領域番号 23121506
研究種目

新学術領域研究(研究領域提案型)

配分区分補助金
審査区分 生物系
研究機関沖縄科学技術大学院大学 (2012)
東京大学 (2011)

研究代表者

山本 雅  沖縄科学技術大学院大学, その他の研究科, 教授 (40134621)

研究期間 (年度) 2011-04-01 – 2013-03-31
研究課題ステータス 完了 (2012年度)
配分額 *注記
8,840千円 (直接経費: 6,800千円、間接経費: 2,040千円)
2012年度: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)
2011年度: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)
キーワード蛋白質リン酸化 / Tob蛋白質 / 増殖シグナル / DNA損傷 / X線結晶構造解析 / CCR4-NOT複合体 / CNOT3蛋白質 / 細胞周期
研究実績の概要

TobやCCR4-NOTの構造解析を進めた。
(1)C端側を、43アミノ酸残基と53アミノ酸残基を欠失させた、野生型Tob蛋白質(それぞれTob301,Tob291)を調製した。Tob301に比べTob291は発現量が3倍程度よく、約4リッター培養から3 mgの精製蛋白質を得た。結晶化に成功したが解析に適した回折は得られなかったので会合蛋白質との共結晶構造解析の準備を開始した。
(2)UV等によるDNA損傷依存的にTobをリン酸化し安定化させるキナーゼが、CGK733阻害剤感受性であることを見出していた。しかし、既知のCGK733感受性キナーゼである、ATRやATMにはそのような作用は見られなかった。一方で2D-DIGE法やin vitro リン酸化法を用いた研究から、Cdc7キナーゼがTobと会合しリン酸化しうることを示した。Cdc7によるTobのin vitroリン酸化実験から被リン酸化アミノ酸残基としてSer151, 153、205、並びにThr204を見出した。このうち、少なくともSer151のリン酸化は、in vivoでのTobの安定性増大に寄与することを示した。
(3)CCR4-NOT複合体の活性サブユニット中、直接会合することが示されているCNOT6LとCNOT7について、それぞれ全長配列を調製し、in vitroで会合させて複合体を精製し、結晶を得た。CNOT2とCNOT3の会合に関わるNOT boxをGST融合蛋白質として調製したが、精製過程でNOT box配列がグルタチオンセファロースに特異的に吸着することがわかり、調製方法の改善を図った。
(4)X線結晶解析用に昆虫細胞系でCNOT3を大量発現させたが、この配列も樹脂に吸着することが分かった。現在別法で調製するとともに、CNOT3をドメイン構造に基づいて3分割して結晶化解析に十分な量を調製した。

現在までの達成度 (段落)

24年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

24年度が最終年度であるため、記入しない。

報告書

(2件)
  • 2012 実績報告書
  • 2011 実績報告書
  • 研究成果

    (19件)

すべて 2013 2012 2011 その他

すべて 雑誌論文 (12件) (うち査読あり 12件) 学会発表 (5件) 備考 (2件)

  • [雑誌論文] ASBEL, an ANA/BTG3 antisense transcript required for tumorigenicity of ovarian carcinoma2013

    • 著者名/発表者名
      Yanagida S, Taniue K, Yamamoto T. (9名)
    • 雑誌名

      Sci Rep

      巻: Vol.3 号: 1 ページ: 1305-1305

    • DOI

      10.1038/srep01305

    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Structural basis for the altered drug sensitivities of non-small cell lung cancer-associated mutants of human epidermal growth factor receptor2013

    • 著者名/発表者名
      Yoshikawa S, Kukimoto-Niino M, Yamamoto T. (20名)
    • 雑誌名

      Oncogene

      巻: Vol.32 号: 1 ページ: 27-38

    • DOI

      10.1038/onc.2012.21

    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Structural flexibility regulates phosphopeptide-binding activity of the tyrosine kinase binding domain of Cbl-c.2012

    • 著者名/発表者名
      Takesita K
    • 雑誌名

      J. Biochem.

      巻: 152 号: 5 ページ: 487-495

    • DOI

      10.1093/jb/mvs085

    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Inhibition of DNA damage-induced apoptosis through Cdc7-mediated stabilization of Tob.2012

    • 著者名/発表者名
      Suzuki T
    • 雑誌名

      J Biol Chem

      巻: Nov 23;287(48) 号: 48 ページ: 40256-40265

    • DOI

      10.1074/jbc.m112.353805

    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Tob2 Inhibits Peroxisome Proliferator-Activated Receptor γ2 expression by sequestering Smads and C/EBPα during adipocyte differentiation2012

    • 著者名/発表者名
      Takahashi A, Morita M, Yamamoto T. (5名)
    • 雑誌名

      Mol and Cell Biol

      巻: Vol.32 号: 24 ページ: 5067-5077

    • DOI

      10.1128/mcb.00610-12

    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Involvement of CNOT3 in mitotic progression through inhibition of MAD1 expression2012

    • 著者名/発表者名
      Takahashi A, et al
    • 雑誌名

      Biochem.Biophys.Res.Commun.

      巻: 419 号: 2 ページ: 268-273

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2012.02.007

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] miRNA-mediated deadenylation is orchestrated by GW182 through two conserved motifs that interact with CCR4-NOT2011

    • 著者名/発表者名
      Fabian MR, Cieplak MK, Yamamoto T (11名)
    • 雑誌名

      Nat Struct and Mol Biol

      巻: Vol.18 号: 11 ページ: 1211-1217

    • DOI

      10.1038/nsmb.2149

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] The role of the CNOT1 subunit of the CCR4-NOT complex in mRNA deadenylation and cell viability2011

    • 著者名/発表者名
      Ito K, et al
    • 雑誌名

      Protein Cell

      巻: 2 号: 4 ページ: 755-763

    • DOI

      10.1111/j.1365-2443.2011.01492.x

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Obesity resistance and increased hepatic expression of catabolism- related mRNAs in Cnot3+/- mice2011

    • 著者名/発表者名
      Morita M, Oike Y, Yamamoto T (10名)
    • 雑誌名

      EMBO J

      巻: Vol.30 号: 22 ページ: 4678-4691

    • DOI

      10.1038/emboj.2011.320

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Distinct expression patterns of the subunits of the CCR4-NOT deadenylase complex during neural development2011

    • 著者名/発表者名
      Chen C, et al
    • 雑誌名

      Biochem.Biophys.Res.Commun.

      巻: 411 号: 2 ページ: 360-364

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2011.06.148

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Monoubiquitination of Tob/BTG family proteins competes with degradation-targeting polyubiquitination.2011

    • 著者名/発表者名
      Suzuki T
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun

      巻: 409 号: 1 ページ: 70-4

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2011.04.107

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Genetic incorporation of a photo-crosslinkable amino acid reveals novel protein complexes with GRB2 in mammalian cells2011

    • 著者名/発表者名
      Hino N., Oyama M., Sato A., Mukai T., Iraha F., Hayashi A., Kozuka-Hata H., Yamamoyo T., Yokoyama S., Sakamoto K
    • 雑誌名

      J. Mol. Biol.

      巻: 406 号: 2 ページ: 343-353

    • DOI

      10.1016/j.jmb.2010.12.022

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] Effect of Tob deficiency in hepatocellular carcinoma development.2012

    • 著者名/発表者名
      Suzuki, T
    • 学会等名
      第71回日本癌学会学術総会
    • 発表場所
      ロイトン札幌、さっぽろ芸文館、札幌市教育文化会館
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [学会発表] Possible link between the CCR4-NOT deadenylase and enhanced expression of specific mRNAs that are related to energy metabolism2011

    • 著者名/発表者名
      Miura A, et al
    • 学会等名
      第34回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      2011-12-14
    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
  • [学会発表] Competition of Cdc7/Tob with Cul4-DDB1-Cdt2 E3 complex in DNA damage-induced apoptosis2011

    • 著者名/発表者名
      Suzuki T, et al
    • 学会等名
      第34回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      2011-12-13
    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
  • [学会発表] Tob2 inhibits adipocyte differentiation2011

    • 著者名/発表者名
      Takahashi A, et al
    • 学会等名
      第34回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      2011-12-13
    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
  • [学会発表] CDC7-dependent inhibition of Tob degradation Mintains cell survival after DNA damage2011

    • 著者名/発表者名
      Suzuki T, Masai H, Yamamoto T
    • 学会等名
      第70回日本癌学会学術総会
    • 発表場所
      名古屋
    • 年月日
      2011-10-03
    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
  • [備考] OIST 細胞シグナルユニットホームページ

    • URL

      https://groups.oist.jp/ja/csu

    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [備考]

    • URL

      http://groups.oist.jp/csu

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書

URL: 

公開日: 2011-04-06   更新日: 2018-03-28  

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