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M期DNA損傷の修復系とDNA複製開始制御の連係機構の解析

公募研究

研究領域ゲノム複製・修復・転写のカップリングと普遍的なクロマチン構造変換機構
研究課題/領域番号 23131512
研究種目

新学術領域研究(研究領域提案型)

配分区分補助金
審査区分 生物系
研究機関兵庫県立大学

研究代表者

西谷 秀男  兵庫県立大学, 生命理学研究科, 教授 (40253455)

研究期間 (年度) 2011-04-01 – 2013-03-31
研究課題ステータス 完了 (2012年度)
配分額 *注記
13,260千円 (直接経費: 10,200千円、間接経費: 3,060千円)
2012年度: 6,630千円 (直接経費: 5,100千円、間接経費: 1,530千円)
2011年度: 6,630千円 (直接経費: 5,100千円、間接経費: 1,530千円)
キーワード修復 / 複製 / 細胞周期 / ゲノム / タンパク質分解 / DNA損傷 / DNA複製 / ユビキチン
研究実績の概要

染色体の再複製はゲノム異常の要因となる。複製のライセンス化因子Cdt1はS期に素早く分解され再複製を抑制している。このとき機能するユビキチンリガーゼCRL4(Cul4-DDB1)-Cdt2は、クロマチン結合型PCNAに依存し、S期のみならずDNA損傷時にもCdt1を分解する。M期細胞がUV照射を受けた際、G1期進行に伴いCdt1が分解される結果、ライセンス化が抑制されG1期停止が起こる。G1期にUV照射した場合より生存率が高く、その機構を明らかにするためさらに研究を行った。
(1). M期UV照射後のG1期停止が、DNA損傷チェックポイント機構によるのか調べるため、Cdt1あるいはCdt2を多コピー発現した細胞を作製し、G1期停止頻度を比べたところ、それぞれの細胞で減少および増加が見られた。よって、ライセンス化抑制に依存して機能する新たな細胞周期制御機構が働くと結論した。また、分解に必須なPCNA結合部位に変異をもつCdt1を発現する細胞を構築したが、ライセンス化が回復せず、この部位は分解以外にも働きがあると考えられた。(2). NER(塩基除去修復)の過程に依存してCdt1は速やかに分解される。実際、NER欠損XP-A細胞を用いて解析すると、Cdt1の分解に遅れが見られたが、90分後には分解された。他の修復系であるミスマッチ修復が作動していることが示唆された。(3). NER系を主とするUV照射後のPCNAローディングはS期の場合と異なるのか解析したところ、UV照射後はローダーRFC1-RFCを、S期においては別のCtf18-RFCを必要とすることを見いだした。
このように、CRL4-Cdt2はDNA損傷時とS期において、より速やかにCdt1を分解するシステムを用いてライセンス化を抑制し、異常なDNA複製を抑制しゲノムの安定性を維持していると考えられる。

現在までの達成度 (段落)

24年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

24年度が最終年度であるため、記入しない。

報告書

(2件)
  • 2012 実績報告書
  • 2011 実績報告書
  • 研究成果

    (14件)

すべて 2013 2012 2011 その他

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 4件) 学会発表 (8件) 図書 (1件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Two different RFC proteins, Ctf18 and RFC1 separately control PCNA-CRL4Cdt2-mediated Cdt1 proteolysis during S phase and following UV-irradiation2012

    • 著者名/発表者名
      Shiomi Y, Ishii T, Hayashi A, Shinmyozu K, Nakayama J, Sugasawa K, & Nishitani H
    • 雑誌名

      Mol Cell Biol

      巻: 32 号: 12 ページ: 2279-88

    • DOI

      10.1128/mcb.06506-11

    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Checkpoint Kinase ATR Phosphorylates Cdt2, a Substrate Receptor of CRL4 Ubiquitin Ligase, and Promotes the Degradation of Cdt1 following UV-irradiation2012

    • 著者名/発表者名
      Hiroki Sakaguchi, Toshihiro Takami, Yoshinori Yasutani, Takeshi Maeda, Masayuki Morino, Takashi Ishii, Yasushi Shiomi, Hideo Nishitani
    • 雑誌名

      PLoS ONE

      巻: 7 号: 9 ページ: e46480-e46480

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0046480

    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Inhibition of DNA damage-induced apoptosis through Cdc7-mediated stabilization of Tob.2012

    • 著者名/発表者名
      Suzuki T
    • 雑誌名

      J Biol Chem

      巻: Nov 23;287(48) 号: 48 ページ: 40256-40265

    • DOI

      10.1074/jbc.m112.353805

    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Cdt1 is differentially targeted for degradation by anticancer chemotherapeutic drugs2012

    • 著者名/発表者名
      Stathopoulou A, et al
    • 雑誌名

      PLoS One

      巻: 7 号: 3 ページ: e34621-e34621

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0034621

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] ユビキチンリガーゼCRL4-Cdt2によるPCNA依存的なユビキチン化機構の解析2012

    • 著者名/発表者名
      林晃世, 塩見泰史, 西谷秀男
    • 学会等名
      第35回 日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      福岡国際会議場、マリンメッセ福岡 (福岡県)
    • 年月日
      2012-12-11
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [学会発表] M期のUV損傷に応答したCdt1分解によるG1-DNA損傷チェックポイント2012

    • 著者名/発表者名
      森野公之, 塩見泰史, 西谷秀男
    • 学会等名
      第35回 日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      福岡国際会議場、マリンメッセ福岡 (福岡県)
    • 年月日
      2012-12-11
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [学会発表] CRL4-Cdt2によるCdt1のユビキチン化はそれぞれのPIPボックスを介したPCNA結合に依存する2012

    • 著者名/発表者名
      石井健士, 林晃世, 末永尚弘, 中島秀祐, 塩見泰史, 西谷秀男
    • 学会等名
      第35回 日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      福岡国際会議場、マリンメッセ福岡 (福岡県)
    • 年月日
      2012-12-11
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [学会発表] Novel function of RFC complexes in genome stability through PCNA-CRL4Cdt2 mediated Cdt1 degradation during DNA replication and repair2012

    • 著者名/発表者名
      塩見泰史, 林晃世, 石井健士, 中山潤一,菅澤薫, 塩見泰史, 西谷秀男
    • 学会等名
      第35回 日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      福岡国際会議場、マリンメッセ福岡 (福岡県)
    • 年月日
      2012-12-11
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [学会発表] Regulation of replication-coupled proteolysis of licensing factor Cdt1 by ubiquitin ligase CRL4-Cdt22012

    • 著者名/発表者名
      Takashi Ishii, Yasushi Shiomi, and Hideo Nishitani
    • 学会等名
      The 8 th 3R Symposium
    • 発表場所
      Awaji Yumebutai International Conference Center(兵庫県)
    • 年月日
      2012-11-25
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [学会発表] New function of PCNA loaders, RFC1-RFC and Ctf18-RFC, in genome stability through PCNA-CRL4Cdt2 mediated Cdt1 degradation2011

    • 著者名/発表者名
      Shiomi Y, et al
    • 学会等名
      第34回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜(神奈川県)
    • 年月日
      2011-12-15
    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
  • [学会発表] CRL4Cdt2によるCdt1のユビキチン化はCdt2のPCNAへの結合を必要とする2011

    • 著者名/発表者名
      石井健士, 他
    • 学会等名
      第34回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜(神奈川県)
    • 年月日
      2011-12-15
    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
  • [学会発表] DNA損傷時におけるユビキチンリガーゼCRL4Cdt2の活性化制御機構2011

    • 著者名/発表者名
      坂口洋貴, 他
    • 学会等名
      第34回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜(神奈川県)
    • 年月日
      2011-12-15
    • 関連する報告書
      2011 実績報告書
  • [図書] タンパク質分解系による染色体の再複製抑制機構 実験医学(増刊) 細胞周期2013

    • 著者名/発表者名
      西谷秀男
    • 総ページ数
      6
    • 出版者
      羊土社
    • 関連する報告書
      2012 実績報告書
  • [備考]

    • URL

      http://www.sci.u-hyogo.ac.jp/life/biosig/japanese/Top.html

    • 関連する報告書
      2011 実績報告書

URL: 

公開日: 2011-04-06   更新日: 2018-03-28  

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