| 研究領域 | 上皮管腔組織の形成・維持と破綻における極性シグナル制御の分子基盤の確立 |
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| 研究課題/領域番号 |
24112525
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| 研究種目 |
新学術領域研究(研究領域提案型)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
生物系
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| 研究機関 | 京都産業大学 |
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研究代表者 |
中村 暢宏 京都産業大学, 総合生命科学部, 教授 (50294955)
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| 研究期間 (年度) |
2012-04-01 – 2014-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2013年度)
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| 配分額 *注記 |
4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)
2013年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
2012年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
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| キーワード | ゴルジ体 / GRASP65 / βカテニン / リン酸化 |
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| 研究概要 |
イヌ腎臓上皮細胞(MDCK)をガラス基質上でコンフルエントになるまで培養し，単層上皮様の構造を形成させた。免疫蛍光染色法を用いて，ゴルジ体に局在するGRASP65の局在を解析したところ，細胞が密着結合を形成し単層上皮様の構造を形成するにともなって，GRASP65の細胞膜への移動が観察された。GRASP65は小胞繋留因子として機能し，小胞体からゴルジ体への輸送小胞の標的となり輸送を促進する働きを持つ。従って，GRASP65は単層上皮構造形成の際，細胞膜にも局在して，ゴルジ体を介さない新規な輸送経路に関与することが示唆された。GRASP65の細胞膜局在を形態学的・生化学的手法で精査したところ，リン酸化されたGRASP65が細胞表面に移行している可能性が示唆された。しかしながら，リン酸化GRASP65抗体を用いてリン酸化GRASP65のウェスタンブロッティングによる検出を試みたところ，予想される65KDaの位置にシグナルが検出されず，一方110KDaの位置に強いシグナルが検出された。共同研究によって，この110KDaのタンパク質を同定したところ，βカテニンであることが明らかとなった。この結果から，リン酸化GRASP65抗体がβカテニンと交叉反応することが強く示唆された。従って，残念ながらリン酸化GRASP65の細胞膜への特異的な移行を証明することができなかった。しかしながら，GRASP65を過剰発現させると細胞膜へ容易に移行することから，リン酸化GRASP65が細胞分化・分極にともなって細胞膜へと移行する可能性は十分残っている。逆にβカテニンとの交叉反応は，リン酸化されたGRASP65とβカテニンが共通の結合基質を持つ可能性を示しており，GRASP65とβカテニンのクロストークという画期的な可能性が示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
理由
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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