ＵＨＲＦ１タンパク質の天然変性領域の機能－構造解析

• 研究領域: 天然変性タンパク質の分子認識機構と機能発現
• 研究課題/領域番号: 24113711
• 研究種目: 新学術領域研究(研究領域提案型)
• 配分区分: 補助金
• 審査区分: 生物系
• 研究機関: 横浜市立大学 (2013); 京都大学 (2012)
• 研究代表者: 有田 恭平 横浜市立大学, 生命医科学研究科, 准教授 (40549648)
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2014-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 11,180千円 (直接経費: 8,600千円、間接経費: 2,580千円); 2013年度: 5,590千円 (直接経費: 4,300千円、間接経費: 1,290千円); 2012年度: 5,590千円 (直接経費: 4,300千円、間接経費: 1,290千円)
• キーワード: 天然変性タンパク質 / UHRF1 / エピジェネティクス

研究概要

DNAのメチル化やヒストンの翻訳後修飾はエピジェネティクスな情報の担い手であり、真核生物の初期胚の形成・発生や細胞分化、遺伝子発現制御に極めて重要な働きをしている。UHRF1はヒストン修飾の認識とDNAメチル化の維持に関与しており、エピジェネティクスな機構を統合する因子であると考えられている。UHRF1は5つの機能ドメインを有している。各ドメイン間のlinkerは天然変性領域であると予測されているがUHRF1のエピジェネティクスな機能に重要な働きをしている。
本年度はDNAメチル化の維持機構に関与するUHRF1とDnmt1に注目し、これら2つの因子の相互作用様式の解明を試みた。特にUHRF1の天然変性領域の機能を構造生物学的, 生化学、細胞生物学的な手法を用いて明らかにすることを目的とした。
Dnmt1のRFTSとの相互作用にUHRF1のリンカー領域が寄与していることを明らかにした。さらにこの結合を等温滴定型カロリーメトリーを用いて、定量的に解析した。NMRによる滴定実験から、リンカーのどのアミノ酸残基がRFTSとの相互作用に寄与しているかを明らかにし、その構造生物学的な情報を得ることに成功した。実際に、相互作用に関与するアミノ酸残基を置換した変異体では、RFTSとの親和性が落ちることや結合比が大きく変化し、特異的に相互作用ができなくなっていることが明らかになった。これらの実験結果を踏まえて、原子レベルでの構造情報からRFTSとUHRF1の相互作用の詳細な機構の解明のために、複合体の結晶化を行った。現在結晶はまだ得られていないが、今後さらに相互作用部位の精密化や結晶化条件の探索を行うことにより複合体のX線結晶構造解析を目指す予定である。

現在までの達成度 (区分)

理由

25年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

25年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] The DNA methyltransferase Dnmt1 directly interacts with the SET and RING finger-associated (SRA) domain of the multifunctional protein Uhrf1 to facilitate accession of the catalytic center to hemi-methylated DNA (2014)
  • 著者名/発表者名: Berkyurek AC, Suetake I, Arita K, Takeshita K, Nakagawa A, Shirakawa M, Tajima S
  • 雑誌名: J Biol Chem 巻: 289(1) 号: 1 ページ: 379-86
  • DOI: 10.1074/jbc.m113.523209
  • NAID: 120006770872
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Uhrf1-dependent H3K23 ubiquitylation couples maintenance DNA methylation and replication (2013)
  • 著者名/発表者名: Nishiyama, A
  • 雑誌名: Nature 巻: 502 号: 7470 ページ: 249-253
  • DOI: 10.1038/nature12488
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of Fluorogenic Probes for Quick No-Wash Live-Cell Imaging of Intracellular Proteins (2013)
  • 著者名/発表者名: Y. Hori, T. Norinobu, M. Sato, K. Arita, S. Shirakawa & K. Kikuchi
  • 雑誌名: J. Am. Chem. Soc 巻: 135 号: 33 ページ: 12360-12365
  • DOI: 10.1021/ja405745v
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Quantitative comparison of protein dynamics in live cells and in vitro by in-cell (19)F-NMR. (2013)
  • 著者名/発表者名: Takaoka Y, Kioi Y, Morito A, Otani J, Arita K, Ashihara E, Ariyoshi M, Tochio H, Shirakawa M, Hamachi I.
  • 雑誌名: Chem Commun 巻: 49 号: 27 ページ: 2801-2803
  • DOI: 10.1039/c3cc39205h
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Structural basis of the versatile DNA recognition ability of the methyl-CpG binding domain of methyl-CpG binding domain protein 4. (2013)
  • 著者名/発表者名: Otani, J., Arita, K., Kato, T., Kinoshita, M., Kimura, H., Suetake, I., Tajima, S., Ariyoshi, M., Shirakawa, M.
  • 雑誌名: J Biol. Chem. 巻: 288 号: 9 ページ: 6351-6362
  • DOI: 10.1074/jbc.m112.431098
  • 査読あり
• [雑誌論文] Lysyl 5-Hydroxylation, a Novel Histone Modification, by Jumonji Domain Containing 6 (JMJD6) (2013)
  • 著者名/発表者名: M. Unoki, A. Masuda, N. Dohmae, K. Arita, M. Yoshimatsu, Y. Iwai, Y. Fukui, K. Ueda, R. Hamamoto, M. Shirakawa, H. Sasaki, and Y. Nakamura
  • 雑誌名: The Journal of biological chemistry 巻: 288(9) 号: 9 ページ: 6053-62
  • DOI: 10.1074/jbc.m112.433284
  • 査読あり
• [雑誌論文] Recognition of modification status on a histone H3 tail by linked histone reader modules of the epigenetic regulator UHRF1 (2012)
  • 著者名/発表者名: K.Arita, S.Isogai, T.Oda, M.Unoki, K.Sugita, N.Sekiyama, K.Kuwata, R.Hamamoto, H.Tochio, M.Sato, M.Ariyoshi, and M.Shirakawa
  • 雑誌名: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 巻: 109 号: 32 ページ: 12950-12955
  • DOI: 10.1073/pnas.1203701109
  • 査読あり
• [学会発表] Molecular Mechanism of Methylated DNA Recognition by SRA Domain of UHRF2 (2012)
  • 著者名/発表者名: Terumitsu Murakami, Kyohei Arita , Mariko Ariyoshi , Hidehito Tochio , Masahiro Shirakawa
  • 学会等名: 第35回分子生物学会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2012-12-11
• [備考] 横浜市立大学構造生物学研究室
  • URL: http://www-mls.tsurumi.yokohama-cu.ac.jp/lab/xtal-mls.html
• [備考] 京都大学 工学研究科 生体分子機能化学講座
  • URL: http://www.moleng.kyoto-u.ac.jp/~moleng_01/
• [備考] 横浜市立大学 生命医科学研究科 構造生物学研究室
  • URL: http://www-mls.tsurumi.yokohama-cu.ac.jp/xtal-mls/index.html