| 研究領域 | 生合成マシナリー：生物活性物質構造多様性創出システムの解明と制御 |
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| 研究課題/領域番号 |
25108711
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| 研究種目 |
新学術領域研究(研究領域提案型)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
理工系
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| 研究機関 | 信州大学 |
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研究代表者 |
片岡 正和 信州大学, 学術研究院工学系, 准教授 (90332676)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2014年度)
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| 配分額 *注記 |
7,020千円 (直接経費: 5,400千円、間接経費: 1,620千円)
2014年度: 3,510千円 (直接経費: 2,700千円、間接経費: 810千円)
2013年度: 3,510千円 (直接経費: 2,700千円、間接経費: 810千円)
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| キーワード | 接合伝達 / 放線菌 / 枯草菌 / 線状プラスミド / 環状プラスミド / RP4 / 大腸菌 / 納豆菌 / 種間接合 |
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| 研究実績の概要 |
放線菌線状プラスミド、SAP1の系が有効であることは確認できた。接合伝達利用の有効性は十分発揮できたことより、他のベクターに接合能を付与できれば、さらに接合系の有用性は広がる。我々が研究してきた放線菌伝達性プラスミドpSN22の伝達に関与する必須領域traR, traA, traB, cltを同定し、それらを移植することで非伝達性のプラスミドを伝達性に変換可能か否かを試した。Chenらが開発した線状クローニングベクターpLUS9800に上記必須領域 (RABclt) をクローン化した。本ベクターは線状にしない限り、環状でθ複製型のプラスミドとして存在する。また大腸菌から分離したのち、制限酵素で処理して線状化した後、放線菌に導入すると線状プラスミドとして存在する。RABcltをクローン化したベクターは伝達能を示した。また、SAP1の伝達必須領域の移植によるpLUS9800の伝達も確認したが、線状レプリコンにした場合にはttrAを要求した。
IncP1グループに属する広宿主域プラスミド、RP4の接合伝達系を利用した遺伝子操作系の確立を目指した。RP4は多くの菌株に対する接合伝達が可能な系であり、本研究で中間宿主として選択した枯草菌に対しても接合伝達する可能性が高いと予想した。シャトルベクターを作製し、大腸菌S17-1ΔMuから枯草菌BEST22142A(Spc)への接合伝達条件を検討し、接合の最適化を行った。培養条件、接合条件などを検討し、RP4 システムによる接合を最適化した。また、大腸菌の系では効率が高すぎて、はっきりとした結論が得られていなかったoriTの最適長について、属間接合の系を用いてはっきりとした結論を得ることができた。この系は既に希望する研究者に配布して実効性をチェックしている。
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| 現在までの達成度 (段落) |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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