| 配分額 *注記 |
7,410千円 (直接経費: 5,700千円、間接経費: 1,710千円)
2014年度: 3,770千円 (直接経費: 2,900千円、間接経費: 870千円)
2013年度: 3,640千円 (直接経費: 2,800千円、間接経費: 840千円)
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| 研究実績の概要 |
海生糸状菌のポリケタイド合成酵素（PKS）遺伝子の解析を目的として、shimalactone生産菌Emericella variecolor GF10とhimeic acid生産菌Aspergillus sp. MF275を中心に解析を進めた。
・shimalactone生合成遺伝子クラスター
これまでにShmA PKSがpreshimalactoneを合成することを同定したが、今年度は、PKS以下の各酵素の機能を確認するため、異なるマーカーを持つプラスミド上に各遺伝子を組み込んだShmB、ShmD、ShmF、ShmGの各発現プラスミドを構築し、ShmAとともに、A. oryzae で発現させた。その結果、ShmAとShmBのみでshimalactone Aとその立体異性体であるBが生成することを確認した。これは、ShmAにより生成したpreshimalactoneがShmBによるエポキシ化を受けた後、A. oryzae内で非酵素的にoxabicylo[2.2.1]環系形成と二重結合の異性化、さらに8π-6π閉環が進行し、shimalactoneが生成したものと考えられた。また、ShmA, B, D, F, Gの全てを組み込んだ形質転換体では、shimalactone Aの選択性ならびに生産性が上がっており、ShmD, F, Gがpreshimalactone oxideからのoxabicylo[2.2.1]環系形成、二重結合の異性化、8π-6π閉環とその際の立体選択性に寄与しているものと考えられた。
・himeic acidの生合成
標識化合物の投与実験により、主鎖が酢酸由来であり、ロイシンが強く取り込まれることから、ドラフトゲノム情報より、候補となるPKS-NRPS生合成遺伝子クラスターを２つに絞ることができた。
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