| 研究領域 | 免疫四次元空間ダイナミクス |
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| 研究課題/領域番号 |
25111509
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| 研究種目 |
新学術領域研究(研究領域提案型)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
生物系
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| 研究機関 | 北里大学 |
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研究代表者 |
片桐 晃子 北里大学, 理学部, 教授 (00322157)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2014年度)
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| 配分額 *注記 |
5,720千円 (直接経費: 4,400千円、間接経費: 1,320千円)
2014年度: 2,860千円 (直接経費: 2,200千円、間接経費: 660千円)
2013年度: 2,860千円 (直接経費: 2,200千円、間接経費: 660千円)
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| キーワード | LFA-1 / Adhesion cascade / Rab13 / Rap1 / migration / homing / 細胞極性 / ケモカイン / 免疫動態 / インテグリン / シグナル伝達 / Mst1 |
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| 研究実績の概要 |
1）Mst1の下流で細胞骨格系タンパク質VASPがリン酸化されることで、アクチンの伸展が生じ、LFA-1が前方へ極性輸送されることがわかった。また、VASPを直接リン酸化する酵素として、Lats1/2を同定した。すなわち、ケモカイン刺激によってMst1/2が活性化されると、Lats1/2をリン酸化する。これにより活性化されたLats1/2がVASPをリン酸化することが明らかとなった。
2)Rab13がMst1の下流で機能することを昨年度報告しているが、Rab13の下流標的分子として、MICAL-L1が主要な役割を果たす可能性をin vitroでノックダウンし明らかにした。
3) Rab13ノックアウトマウスとOT-II TCR Tgマウスを掛け合わせて作製したマウス由来のprimary Tリンパ球を、骨髄細胞からGM-CSFを用いて作成した樹状細胞を抗原提示細胞として用いて、OVA存在下で刺激したところ、LFA-1依存性の免疫シナプス形成は低下し、増殖及びサイトカイン産生が低下することが判明した。
4)細胞内におけるRap1活性化の過程を、RALGDS-RBD-GFPを用いて解析したところ、ケモカイン刺激によって、Rap1は数秒以内に細胞膜で活性化され、続いてゴルジ周辺、分単位で最終的に極性形成した前方膜に活性化が限局することが判明した。これをFRETによって観察するため、YFPにRap1を、RAPL-RBDにmTurquoiseの付加し、様々な長さのリンカーでつないで、FRET効率を検討し、ケモカイン刺激依存性に活性化を観察できるシステムを開発した。
5)FilaminがLFA-1活性化を阻害しており、Rap1－GTPがその抑制を解除することを報告してきた。Filaminaのノックアウトマウスを用いて、実際にLFA－１接着が亢進していることを確かめた。
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| 現在までの達成度 (段落) |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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