| 研究領域 | 細胞シグナリング複合体によるシグナル検知・伝達・応答の構造的基礎 |
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| 研究課題/領域番号 |
25121701
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| 研究種目 |
新学術領域研究(研究領域提案型)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
生物系
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
石森 浩一郎 北海道大学, 理学(系)研究科(研究院), 教授 (20192487)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2014年度)
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| 配分額 *注記 |
9,100千円 (直接経費: 7,000千円、間接経費: 2,100千円)
2014年度: 4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円)
2013年度: 4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円)
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| キーワード | ヘム / 金属蛋白質 / 生体金属 / 鉄代謝 / 構造解析 |
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| 研究実績の概要 |
IRP制御複合体の蛋白質間相互作用解析 IRPと複合体を形成すると考えられるmRNAのIREに対する結合特性，および，ヘムによるIRE結合阻害効果を検討した。その結果，ゲルシフトアッセイでは，その蛋白質としての安定性が低いため，明確な結果が得られなかったIRP2のIRE親和性について，その解離定数はIRP1のおよそ50％程度の0.013 mMであることが示された。さらに，そのヘムによる阻害効果はついては，1当量のヘムの添加で明確な阻害効果が観測され，阻害効果が現れるまでに数当量のヘムが必要なIRP1に比べ，IRP2のほうが低濃度のヘムによって阻害がかかることが示された。このことは細胞内においてIRP2が主な鉄濃度センサーとして機能していることとも対応している。さらに，IRPのIREからの解離に関しては，精製蛋白質を用いた実験では，数十当量のヘムの添加が必要であり，細胞内においてはヘムシャペロンによるIRPへのヘムの輸送および添加と，そのヘム結合によるIRPのIREからの解離が示唆された。一方，細胞内において，鉄高濃度時にIRPと相互作用することでIRPをユビキチン化し，最終的にはその蛋白質分解を促進するFBXL-5蛋白質についても，その大量精製系の確立を試みた。種々のプロモーターの検討の結果，大腸菌としてRosetta (DE3)pLysSを用い，MBPとの融合蛋白質として発現するのが最も収量が多いことを見出し，FBXL-5の大量精製系を確立することに成功した。
制御系に関連した蛋白質の探索とその機能解析 IRPへヘムを輸送，供与する蛋白質を同定するため，IRPと相互作用する蛋白質の探索を試みた。探索系としては，酵母菌を用いたtwo-hybrid systemと，ヘムを磁気ビーズに結合させた手法について検討を行った。
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| 現在までの達成度 (段落) |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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