| 研究領域 | 細胞シグナリング複合体によるシグナル検知・伝達・応答の構造的基礎 |
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| 研究課題/領域番号 |
25121735
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| 研究種目 |
新学術領域研究(研究領域提案型)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
生物系
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| 研究機関 | 国立遺伝学研究所 |
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研究代表者 |
西野 達哉 国立遺伝学研究所, 分子遺伝研究系, 助教 (50533155)
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| 研究期間 (年度) |
2013-04-01 – 2015-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2014年度)
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| 配分額 *注記 |
9,750千円 (直接経費: 7,500千円、間接経費: 2,250千円)
2014年度: 4,940千円 (直接経費: 3,800千円、間接経費: 1,140千円)
2013年度: 4,810千円 (直接経費: 3,700千円、間接経費: 1,110千円)
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| キーワード | 染色体分配 / タンパク質複合体 / X線結晶構造解析 / 生化学 / 酵素反応 / 生物物理 / 走査プローブ顕微鏡 / 分子認識 / 蛋白質 |
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| 研究実績の概要 |
本研究の目的は真核生物の染色体分配装置の立体構造と機能をタンパク質レベルから細胞レベルに至る多面的な解析を行い、その分子機構を明らかにすることにある。
今年度はCENP-L-CENP-N複合体とCENP-CのNMR解析に向けたサンプル調整を行った。N15とC13ラベルしたサンプルを調整したところ、サンプルの不安定性およびオリゴマー形成のためNMRに必要なタンパク質濃度まで濃縮することができずNMR測定できなかった。一方、より小さなコンストラクトでは４度で2週間ほど安定であった。現在はこの試料を用いて立体構造解析、相互作用領域特定のためNMR解析を行っている。
一方、細胞を用いた解析ではCENP-Cをノックアウトしたニワトリ細胞にドメインを欠失したCENP-Cを導入し、その際に他の染色体分配因子がどのように局在し、そのレベルが変化するかを観察した。その結果、CENP-CのN末端1/3を欠失したコンストラクトではCENP-Hのキネトコア局在レベルが低下した。一方、C末端1/3のCENP-Cコンストラクトではそのような低下は見られなかった。別の染色体分配因子Mis12の場合はN末端1/3欠失したコンストラクトおよびC末端1/3コンストラクトいずれにおいてもキネトコア局在レベルは観測できなかった。このような違いはCENP-HとMis12がCENP-Cに結合する領域及びその制御が異なっていることを意味する。現在はこのような相互作用に関わる領域の立体構造解析を行っている。
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| 現在までの達成度 (段落) |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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