公募研究
新学術領域研究(研究領域提案型)
研究では、転写および酵素反応を定量的に解析、スクリーニングする新規な実験系を確立することを目的とした。それにより従来にない膨大なライプラリーの作製と短時間でのスクリーニングを可能とし、合成生物学 における重要な分子パーツである、酵素やDNA ポリメラーゼープロモーターの新規セットを探索し、有用酵素創出の基盤技術をつくり上げることを目標としている。以下に今年度の成果を列挙する。１）酵母由来Dアミノ酸オキシダーゼ(DAO) を、活性ある形での無細胞タンパク質合成系を確立し、さらにDNA結合タンパク質との融合タンパク質として合成させ、マイクロビーズ上でのHRPとの連続反応により、酵素活性をハイスループットに測定させる系を構築した。２）結合するDNA配列が異なるscCro変異体を複数作製し、それらの結合DNAに対する親和性を測定した。３）トランスグルタミナーゼをDNA結合タンパク質scCro との融合タンパク質として無細胞タンパク質合成系で発現させ、活性体として発現させることに成功した。４）HRPの無細胞タンパク質合成系により活性体として発現に成功し、それをマイクロビーズ上に提示させ、酵素活性を指標としたセルソーターを用 いたハイスループットスクリーニング方法を確立した。 ５）RNAポリメラーゼ－プロモーター配列の無細胞タンパク質合成系を用いたクリーニングシステムの構築した。以上の研究成果は、合成生物学的アプローチに欠かせない新規タンパク質・転写プロモーターの開発に大きく寄与するものである。
27年度が最終年度であるため、記入しない。
すべて 2016 2015 2014 その他
すべて 国際共同研究 (1件) 雑誌論文 (4件) (うち国際共著 1件、 査読あり 3件、 オープンアクセス 3件、 謝辞記載あり 4件) 学会発表 (13件) (うち招待講演 1件)
J. Biosci. Bioeng.
巻: 121 (2) 号: 2 ページ: 147-153
10.1016/j.jbiosc.2015.06.003
110010049474
J Biosci Bioeng.
巻: 121 号: 4 ページ: 471-476
10.1016/j.jbiosc.2015.08.001
40020813089
PLoS One
巻: 10 号: 5 ページ: e0127479-e0127479
10.1371/journal.pone.0127479
Methods Mol Biol.
巻: 1347 ページ: 87-100
10.1007/978-1-4939-2990-0_6
