リポクオリティを認識する受容体分子機構

2015 年度 実績報告書

• 研究領域: 脂質クオリティが解き明かす生命現象
• 研究課題/領域番号: 15H05904
• 研究機関: 順天堂大学
• 研究代表者: 横溝 岳彦 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (60302840)
• 研究分担者: 小林 雄一 東京工業大学, 大学院生命理工学研究科, 教授 (90153650)
• 研究期間 (年度): 2015-06-29 – 2020-03-31
• キーワード: 脂肪酸 / 免疫細胞 / 抗炎症性脂質

研究実績の概要

免疫担当細胞に準備済みの脂肪酸ライブラリー(64種類)を終濃度10 uMで添加し、種々のサイトカインのmRNAとタンパク質の定量を行い、各種脂肪酸の分化への影響を観察した。
a)樹状細胞分化における脂肪酸の影響：B6マウスの骨髄細胞を10 ng/mlのGM-CSFで6日間培養した。分化途中の培養0, 2, 4日目に各脂肪酸を終濃度10 uMで添加した。培養6日目にLPSを終濃度100 ng/mlになるよう添加し、4時間後に細胞からTotal RNAを回収し、定量的PCR法にてIL-12 p35、p40、IL-4、IL-6、TGFβ、IL-23p19のmRNA量を測定した。複数の脂肪酸が、LPSによるIL-12 p35産生を抑制した。
b)T細胞Th0/1/2/17分化における脂肪酸の影響：B6マウスの脾臓とリンパ節より細胞浮遊液を作製し、TER119、pan-NK、CD8α、CD11b、CD11c、B220、CD25抗体でdepletionを行い、naive CD4陽性細胞を単離した。これらを5 ug/mlの濃度でプレートに固相化した抗CD3抗体と0.5 ug/ml抗CD28抗体で4日間刺激し、Th0分化を行うが、刺激開始時と2日後に各脂肪酸を終濃度10 uMで添加した。4日後に培養上清中のIFNγとIL-4をELISAで定量した。同様に、既に確立されている培養条件でTh1/2/17にも分化させる際にも各脂肪酸を終濃度10 uMで添加し、サイトカイン産生への各種脂肪酸の影響を観察した。Th1分化ではIFNγ、Th2分化ではIL-13、Th17分化ではIL-17量を定量した。複数の脂肪酸がサイトカイン産生を阻害した。
c)有機合成法が確立されず、クオリティ研究の遅れている不飽和脂肪酸代謝産物(レゾルビンD4、レゾルビンE1代謝産物) の合成法を確立した。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

ほぼ申請書の平成27年度に記載した通りに研究が遂行できているため。

今後の研究の推進方策

申請書の平成28年度に記載した通りに研究を遂行する。

研究成果

• [国際共同研究] ハーバード大学医学部眼科学/Weil Cornell大学(米国)
  • 国名: 米国
  • 外国機関名: ハーバード大学医学部眼科学/Weil Cornell大学
• [雑誌論文] Leukotriene B4 receptor type 2 (BLT2) enhances skin barrier function by regulating tight junction proteins. F (2016)
  • 著者名/発表者名: Ishii Y, Saeki K, Liu M, Sasaki F, Koga T, Kitajima K, Meno C, Okuno T, Yokomizo T.
  • 雑誌名: FASEB J 巻: 30 ページ: 933-947
  • DOI: 10.1096/fj.15-279653
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Modulation of leukotriene B4 receptor 1 signaling by receptor for advanced glycation end products (RAGE). (2016)
  • 著者名/発表者名: Ichiki T, Koga T, Okuno T, Saeki K, Yamamoto Y, Yamamoto H, Sakaguchi M, Yokomizo T.
  • 雑誌名: FASEB J 巻: 31 ページ: 000-000
  • DOI: 10.1096/fj.201500117
• [雑誌論文] The absence of the leukotriene B4 receptor BLT1 attenuates peripheral inflammation and spinal nociceptive processing following intraplantar formalin injury. (2015)
  • 著者名/発表者名: Asahara M, Ito N, Yokomizo T, Nakamura M, Shimizu T, Yamada Y.
  • 雑誌名: Mol Pain 巻: 11 ページ: 11
  • DOI: 10.1186/s12990-015-0010-9
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] The leukotriene B4 receptor BLT1 is stabilized by transmembrane helix capping mutations. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hori T, Nakamura M, Yokomizo T, Shimizu T, Miyano M.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Rep 巻: 4 ページ: 243-249
  • DOI: doi:10.1016/j.bbrep.2015.09.007
  • 査読あり
• [雑誌論文] An inhaled phosphodiesterase 4 inhibitor E6005 suppresses pulmonary inflammation in mice. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kubota S, Watanabe M, Shirato M, Okuno T, Higashimoto I, Machida K, Yokomizo T, Inoue H.
  • 雑誌名: Eur J Pharmacol 巻: 768 ページ: 41-48
  • DOI: 10.1016/j.ejphar.2015.10.013
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Biochemical Characterization of Three BLT Receptors in Zebrafish. (2015)
  • 著者名/発表者名: Okuno T, Ishitani T, Yokomizo T.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 10 ページ: e0117888
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0117888
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Resolvin E1 inhibits dendritic cell migration in the skin and attenuates contact hypersensitivity responses. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sawada Y, Honda T, Hanakawa S, Nakamizo S, Murata T, Ueharaguchi-Tanada Y, Ono S, Amano W, Nakajima S, Egawa G, Tanizaki H, Otsuka A, Kitoh A, Dainichi T, Ogawa N, Kobayashi Y, Yokomizo T, Arita M, Nakamura M, Miyachi Y, Kabashima K.
  • 雑誌名: J Exp Med 巻: 212 ページ: 1921-1930
  • DOI: 10.1084/jem.20150381
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] ROCK-Isoform-Specific Polarization of Macrophages Associated with Age-Related Macular Degeneration. C (2015)
  • 著者名/発表者名: Zandi S, 他10名、Yokomizo T, Kim Y B, Sweetnam P, Ishibashi T, Hafezi-Moghadam A.
  • 雑誌名: Cell Rep 巻: 10 ページ: 1173-1186
  • DOI: 10.1016/j.celrep.2015.01.050
  • 査読あり / 国際共著
• [学会発表] oles of leukotriene B4 receptor type 2 in skin barrier function and wound healing. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ishii Y, Liu M, Saeki K, Kabashima K, *Yokomizo T.
  • 学会等名: Keystone Symposium, Immunity in Skin Development, Homeostasis and Disease.
  • 発表場所: Granlibakken Tahoe, USA
  • 年月日: 2016-02-28 – 2016-03-02
  • 国際学会
• [学会発表] 生理活性脂質受容体BLT1とBLT2：眼疾患治療応用の可能性 (2015)
  • 著者名/発表者名: 横溝岳彦
  • 学会等名: 第35回日本眼薬理学会 特別講演
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2015-09-05 – 2015-09-06
  • 招待講演
• [学会発表] Distinct roles of two leukotriene B4 receptors. (2015)
  • 著者名/発表者名: Yokomizo, T
  • 学会等名: 14th International Conference on Bioactive Lipids in Cancer, Inflammation and Related Diseases, Plenary Lecture
  • 発表場所: Budapest, Hungary
  • 年月日: 2015-07-12 – 2015-07-15
  • 国際学会 / 招待講演
• [図書] Bioactive Lipid Mediators: Current Reviews and Protocols. (2015)
  • 著者名/発表者名: Yokomizo, T and Murakami M
  • 総ページ数: 426
  • 出版者: Springer
• [図書] 脂質疾患学 (2015)
  • 著者名/発表者名: 横溝岳彦、村上誠
  • 総ページ数: 222
  • 出版者: 羊土社
• [備考] 順天堂大学医学部生化学
  • URL: http://plaza.umin.ac.jp/j_bio/