計画研究
真核生物染色体DNAの複製開始は、細胞周期の鍵であるサイクリン依存性キナーゼ(CDK)により促進される。出芽酵母では、複製タンパク質Sld2とSld3がCDKによりリン酸化され、Dpb11タンパク質と結合することにより、複製が開始する。精製タンパク質からなるin vitro複製系でも、Sld2及びSld3のリン酸化は複製開始に必須であるが、Sld3のリン酸化要求性はin vivoと異なることを前年度に示した。さらに今年度は、Sld3と結合するCdc45の変異で、CDKがSld3をリン酸化しなくても複製を開始するCdc45JET1は、in vitro複製を野生型Cdc45以上に促進し、リン酸化部位を多く含むSld3のC末部位を欠いたものでも、複製開始が起こすことができることが分かった。Sld3タンパク質のN末はSld7タンパク質のN末と結合する。Sld7タンパク質はC末で２量体化するため、２分子のSld3と２分子のSld7からなるヘテロ４量体ができる。この複合体の機能を知るため、Sld7のC末をリガンドにより２量体化するDmrBドメインに置換し、in vitroでの複製反応を調べた。その結果、C末を欠くSld3を用いると顕著に２量体化した方が、複製反応をより促進することが分かった。一方、細胞内では２量体化しない場合には、DNA鎖を切断するZeocinに弱く感受性を示した。これらのことは、Sld7タンパク質の２量体化の複製開始への寄与を示唆する。複製フォークは、DNAダメージに遭遇したり、DNA合成の基質であるヌクレオチドが欠乏したりすると停止する。出芽酵母rDNAでは、この領域に結合するFOB1タンパク質により、複製フォークが方向特異的に停止するが、この系にはDbf4依存性キナーゼ(DDK)が必要であることを前年度までに明らかにした。この反応に必要なタンパク質のDDKによるリン酸化の有無と、フォークの停止を調べたが、特定のタンパク質のリン酸化が複製フォーク停止の決め手とはなっておらず、DDKそのものが構造体として効いている等の可能性が示唆された。
令和元年度が最終年度であるため、記入しない。
すべて 2020
すべて 雑誌論文 (1件) (うち国際共著 1件、 査読あり 1件、 オープンアクセス 1件)
Int. J. Mol. Sci.
巻: 21 ページ: 9484
10.3390/ijms21249484
