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MDA5を欠損するマウスの作製を行った。MDA5欠損マウスはピコルナウイルス科に属するウイルスに対する応答性が顕著に低下していた。一方、RIG-Iによる認識されるウイルス(インフルエンザ、センダイウイルス等)の感染に対する応答性は正常であることから、両者に認識特異性があることが明らかとなった。現在、LGP2を欠損するマウスの作製を行い、ウイルス感染に対する応答性を解析している。さらに、MDA5とRIG-Iに結合する細胞内分子として我々が同定を行ったIPS-1を欠損するマウスの作製を通し、IPS-1が両分子共通に利用される唯一のアダプターであることを明らかとした(審良)。
RIG-Iは、二重鎖RNA刺激によるIFN遺伝子の活性化に関与する分子として発現クローニング法によって同定された。このRIG-I活性化の分子メカニズムをさらに詳細に解析するために、in vitroの実験系を確立し、解析を行った。バキュロウイルスを用いて大量に発現させたRIG-I蛋白質を部分精製し、様々な核酸存在下におけるRIG-Iによる核酸の認識、ATPaseおよびヘリカーゼの活性化などについて解析し、IFN誘導シグナル伝達能との関連について検討した。これまでの解析から、in vitroにおいてもdsRNA依存的にRIG-IのATPaseが活性化され、さらに二重鎖構造をほどくヘリカーゼ活性を検出することに成功している。しかし一方で、RIG-Iのヘリカーゼの活性化とシグナル伝達能とは必ずしも相関しないことが明らかになりつつあり、今後さらに詳細に解析することにより、RIG-Iによるシグナル活性化の分子メカニズムを明らかにしてゆきたい。また、RIG-Iのファミリー分子であるMDA5、LGP2についてもそれらの基質特異性なども含めてin vitro実験系を構築し解析を進めてゆく計画である(藤田)。
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