| 研究領域 | 分子高次系機能解明のための分子科学―先端計測法の開拓による素過程的理解 |
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| 研究課題/領域番号 |
19056003
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
粟津 邦男 大阪大学, 大学院・工学研究科, 教授 (30324817)
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| 研究分担者 |
間 久直 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助教 (70437375)
石井 克典 大阪大学, 大学院・工学研究科, 助教 (20512073)
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| キーワード | 質量分析 / タンパク質 / MALDI / イオン化メカニズム / 中赤外レーザー / 難溶性タンパク質 |
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| 研究概要 |
マトリックス支援レーザー脱離イオン化(MALDI)法はタンパク質など生体高分子の質量分析におけるイオン化法として広く用いられているが、MALDIのイオン化機序は未だ解明には至っていない。MALDIのイオン化機序を解明することによってイオン化効率や再現性が向上すれば、MALDIのさらなる応用が期待できる。そこで、まず、試料作成に用いられる溶媒に注目し、試料溶媒によるイオン化効率の変化について検討した。用いた溶媒は、水、重水、アセトニトリル、メタノール、エタノール、t-ブタノール、テトラヒドロフラン(THF)の7種である。ペプチドにはbradykinin fragment 1-7を、マトリックスには2,5-dihydroxybenzoic acidを用いた。窒素レーザーを用いたMALDIにより試料をイオン化させ、飛行時間型質量分析計で分析した結果、マトリックスイオンとペプチドイオンの量の間に相関が見られなかった。この結果から、マトリックスのイオン化はペプチドのイオン化に直接関与しておらず、溶媒と試料との水素結合がペプチドのイオン化に大きく寄与している可能性が示唆された。
また、通常の紫外レーザーによるMALDIではイオン化が困難な難溶性タンパク質のイオン化に中赤外レーザーと紫外レーザーの同時照射が有効であるとの報告がある。予備実験としてまず、分析試料にbradykinin fragment 1-7、angiotensin II、P14R、およびinsulinの混合物、マトリックスにα-cyano-4-hydroxycinnamic acidを用いて実験を行った。紫外レーザーのみ、中赤外レーザーのみではイオンが検出されない条件で紫外レーザーと中赤外レーザーを同時に照射した結果、4種の試料全てのイオンを検出することができた。
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