計画研究
(1) NMR計測による糖鎖め揺ちぎの解析酵母変異体を利用した代謝標識により、高マンノース型糖鎖M8Bについて糖残基中の特定の部位を選択的に^<13>Cで標識した一連の標識体を調製した。超高磁場計測によって得られたNMR信号の帰属を行うとともに、緩和解析を通じて本糖鎖の動的性質を評価した。(2) マルチドメインタンパクにおけるドメイン間相互作用の揺らぎの検出イソペプチド結合を介して直鎖状および環状に連結したユビキチン二量体を用いて種々のNMR計測を実施し、ドメイン間の相互作用に関する情報を収集した。一方、タンパク質の立体構造形成を補助する多ドメイン酵素であるプロテインジスルイソメラーゼ(PDI)の基質認識部位を構成するb'およびa'ドメインを対象にして、NMRおよびX線小角散乱により構造解析を行った。その結果、活性部位の酸化還元状態の変化に応じて、これら両ドメインの相互作用とダイナミクスが変化することが判明した。すなわち、活性部位の酸化に伴って、基質結合部位を構成するドメイン間のインターフェースの疎水性領域の溶媒露出度が上昇することが明らかとなった。こうした構造変化を通じて本酵素の基質の捕捉と遊離が制御されているものと考察される。(3) 糖鎖クラスターの構築DHPCとDMPCから成るバイセルにガングリオシドGM1を構成分子として組み込むことを検討した。NMR測定と動的光散乱測定により評価した結果、実際にGM1がバイセルに組み込まれていることが確認でき、更に、DHPC/DMPC/GM1の比率や総脂質濃度を変化させることで、GM1含有バイセルのサイズを制御できることが明らかとなった。また、lyso-GM1を用いて形成したミセルを対象にNMR解析を実施し。ミセル上に提示された糖鎖のコンフォメーションを決定するとともに、アミロイドβ(Aβ)との相互作用様式を明らかにすることに成功した。
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