|
本研究では申請者ががん細胞の酸性適応機構の一端を担っていると明らかにしたlysosomal exocytosisの分子機構と、その酸性適応における普遍的な重要性を明らかにすることを目的と定めている。2021年度は前年度に実施した標的既知化合物ライブラリーを用いたケミカルスクリーニングの結果を踏まえ、複数の化合物で共通していた標的分子、経路についての検証を行った。スクリーニングではPRL発現細胞がlysosomal exocytosisを起こし環境pH応答性が変化した結果、弱アルカリ環境で脆弱となることを利用しこのコンデイションでの細胞死を指標としていたが、検証では各pHでの生育を調べることで環境pH応答性変化に対する影響を調べ、またlysosomal exocytosisについてもリソソーム中の酵素の放出量やリソソーム膜のマーカー分子であるLAMPの細胞表面への移行割合を調べることで評価した。その結果、いずれも当該分子・経路の阻害剤投与だけでなく、ノックダウンやノックアウトによっても明確に抑制されることを確認した。さらに、リガンド刺激や恒常的活性化型変異体の安定発現株を用いた当該経路の活性化による影響についても、上述の方法で同様に検証したところ、環境pH応答性変化やlysosomal exocytosisが惹起されることを明らかにしている。同経路は多くのがん組織で活性化していることが知られており、本年度得られた結果は本研究で目的としているより広範な酸性環境適応機構の解明につながると考えられた。
|
