複製フォークの安定化機構とその破綻による病態の解析

2015 年度 実績報告書

• 研究領域: ゲノムを支える非コードＤＮＡ領域の機能
• 研究課題/領域番号: 23114010
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 高田 穣 京都大学, 放射線生物研究センター, 教授 (30281728)
• 研究期間 (年度): 2011-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: 複製ストレス / ゲノム安定性 / ファンコニ貧血経路 / チェックポイント / 相同組換え

研究実績の概要

複製ストレス下のファンコニ貧血遺伝子FANCD2のゲノムワイドな分布をChIP-seq法にて検索した。U2OS細胞のFANCD2遺伝子座の終止コドンに３XFLAGタグをTALEN法によってノックインし、抗FLAG抗体によってクロスリンクしたクロマチンを免疫沈降し、ゲノムDNAを次世代シーケンサーによる解析にかけた（東大太田研究室、総研大印南研究室との共同研究）。その結果、低用量アフィディコリンによる複製ストレス下におけるFANCD2の全長0.5-1.0Mbpの巨大遺伝子の中央部分イントロンに集積しており、しかも従来同定されたcommon fragile siteとの一致が目立っていた。この集積は、RNAseH1の発現によって低下するらしく、FANCD2のフォーカス形成も著しく低下することがわかった。面白いことに、マイトマイシンC刺激による集積も極度に低下していた。これらの結果は、FANCD2の集積メカニズムにおけるRループ形成の役割を強く示唆している。今後、なぜFANCD2が遺伝子中央部分に集積するのか、解明を試みる。

現在までの達成度 (段落)

27年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

27年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Human FAN1 promotes strand incision in 5'-flapped DNA complexed with RPA. (2015)
  • 著者名/発表者名: Takahashi D, Sato K, Hirayama E, Takata M, Kurumizaka H.
  • 雑誌名: J Biochem 巻: 158 ページ: 263-70
  • DOI: doi: 10.1093/jb/mvv043
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pluripotent cell models of fanconi anemia identify the early pathological defect in human hemoangiogenic progenitors. (2015)
  • 著者名/発表者名: Suzuki NM, Niwa A, Yabe M, Hira A, Okada C, Amano N, Watanabe A, Watanabe K, Heike T, Takata M, Nakahata T, Saito MK.
  • 雑誌名: Stem Cells Transl Med. 巻: 4 ページ: 333-8
  • DOI: 10.5966/sctm.2013-0172
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mutations in the Gene Encoding the E2 Conjugating Enzyme UBE2T Cause Fanconi Anemia. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hira A, Yoshida K, Sato K, Okuno Y, Shiraishi Y, Chiba K, Tanaka H, Miyano S, Shimamoto A, Tahara H, Ito E, Kojima S, Kurumizaka H, Ogawa S, Takata M, Yabe H, Yabe M.
  • 雑誌名: Am J Hum Genet 巻: 96 ページ: 1001-7
  • DOI: 10.1016/j.ajhg.2015.04.022.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Third Report on Chicken Genes and Chromosomes 2015. (2015)
  • 著者名/発表者名: David W Burt, Minoru Takata et al.
  • 雑誌名: Cytogenetic and Genome Research 巻: 145 ページ: 78-179
  • DOI: 10.1159/000430927
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Conserved overlapping gene arrangement, restricted expression and biochemical activities of DNA polymerase ν; (POLN). (2015)
  • 著者名/発表者名: Takata KI, Tomida J, Reh S, Swanhart LM, Takata M, Hukriede NA, Wood RD.
  • 雑誌名: J Biol Chem 巻: 290 ページ: 27278-93
  • DOI: 10.1074/jbc.M115.677419
  • 査読あり / 国際共著
• [学会発表] 相同組換えにおけるＲＰＡ２のユビキチン化を介した分解 (2015)
  • 著者名/発表者名: 稲野将二郎、佐藤浩一、石合正道、勝木陽子、中田慎一郎、胡桃坂仁志、高田 穣
  • 学会等名: BMB2015
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド
  • 年月日: 2015-12-01 – 2015-12-04
  • 招待講演
• [学会発表] 複製ストレスによるFANCD2集積部位のゲノムワイド解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 石合正道、岩嵜航、高橋数冴、久郷和人、小田有沙、大木千夏、福井哲也、河合秀彦、山本卓、太田邦史、印南秀樹、高田穣
  • 学会等名: BMB2015
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド
  • 年月日: 2015-12-01 – 2015-12-04
  • 招待講演
• [学会発表] UBE2T/FANCT is a novel FA gene identified in Japanese Fanconi anemia patients. (2015)
  • 著者名/発表者名: Minoru Takata, Asuka Hira, Kenichi Yoshida, Koichi Sato, Akira Shimamoto, Hitoshi Kurumizaka, Seishi Ogawa, Hiromasa Yabe, and Miharu Yabe.
  • 学会等名: The 16th Ataxia-Teleangiectasia Workshop.
  • 発表場所: Beijing, China
  • 年月日: 2015-10-11 – 2015-10-14
  • 国際学会
• [学会発表] ファンコニ貧血と遺伝性乳がん卵巣がん：相同組換え欠損を基盤とした高発がん症候群 (2015)
  • 著者名/発表者名: 高田 穰
  • 学会等名: 第74回日本癌学会 学術総会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場
  • 年月日: 2015-10-08 – 2015-10-10
  • 招待講演
• [学会発表] DNA damage and repair in Fanconi anemia (2015)
  • 著者名/発表者名: Minoru Takata
  • 学会等名: 第２回IFOM－京都大学合同シンポジウム
  • 発表場所: 京都大学紫蘭会館稲森ホール
  • 年月日: 2015-10-06 – 2015-10-07
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] Mutations in the gene encoding the E2 conjugating enzyme UBE2T cause Fanconi anemia. (2015)
  • 著者名/発表者名: A. Hira, K. Yoshida, K.Sato, Y. Shiraishi, K. Chiba, H. Tanaka, S. Miyano, A. Shimamoto, H.Tahara, E.Ito, S.Kojima, H. Kurumizaka, S.Ogawa, M.Takata, H.Yabe, M. Yabe
  • 学会等名: The 27th Annual Fanconi anemia research fund Scientific Symposium.
  • 発表場所: Toronto, Canada
  • 年月日: 2015-09-17 – 2015-09-20
  • 国際学会
• [学会発表] Identification of UBE2T as a novel Fanconi anemia gene. (2015)
  • 著者名/発表者名: Asuka Hira, Kenichi Yoshida, Koichi Sato, Akita Shimamoto, Hidetoshi Tahara, Hitoshi Kurumizaka, Seishi Ogawa, Minoru Takata, Hiromasa Yabe, Miharu Yabe.
  • 学会等名: ICRR2015
  • 発表場所: 京都国際会館
  • 年月日: 2015-05-25 – 2015-05-29
  • 国際学会
• [図書] DNA Replication, Recombination, and Repair (2015)
  • 著者名/発表者名: Masamichi Ishiai, Junya Tomida, Akiko Itaya, James Hejna, Minoru Takata.
  • 総ページ数: 35
  • 出版者: Springer
• [備考] 研究成果アーカイブ
  • URL: http://house.rbc.kyoto-u.ac.jp/research
• [学会・シンポジウム開催] Forefront of Chromosome Biology (2015)
  • 発表場所: 京都大学先端科学研究棟
  • 年月日: 2015-08-10 – 2015-08-10
• [学会・シンポジウム開催] Non-coding DNA and Chromosomal Integrity (2015)
  • 発表場所: 淡路夢舞台
  • 年月日: 2015-08-05 – 2015-08-08