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本年度はまず、成体マウス卵巣に潜在する卵母細胞の高度利用を目指し、BDF1成体マウス卵巣に潜在する卵胞から卵母細胞を採取し、体外成熟および体外受精を行った。得られた2細胞期胚を偽妊娠雌マウスに胚移植した結果、産仔を得ることができた。1歳、2歳および3歳の雌マウスから得られる卵母細胞数は、年齢とともに少なくなったが、驚くべきことにいずれの年齢のマウスの卵母細胞からも産仔を得ることができた。加齢マウスの内分泌環境や卵母細胞の維持機構に大変興味が持たれた。
次に、卵胞形成機構解明を目指してin vitro系の活用を試みた。FBS添加培地で培養した胎仔卵巣からは二次卵胞が得られない。そこで、二次卵胞形成以前に起きるイベントとして卵母細胞シスト（シスト）崩壊に着目して観察を行った。その結果、FBS添加培地で培養した卵巣のシストは培養10日目でも維持されていたが、FBSの他にエストロジェン受容体の阻害剤（ICI）を添加して培養した卵巣では、シストの崩壊が培養10日目で起き始めていることが示された。そのため、FBS中のエストロジェン（様物質）は、シストの崩壊を遅延させることがわかった。前年度までの解析で、Amh遺伝子は、FBS添加培地で培養した卵巣において、体内由来卵巣の10倍ほど発現が上昇することがわかった。そこでAMHの局在を観察した。FBS添加培地で培養した卵巣では卵胞形成以前の前顆粒膜細胞でAMHの発現が認められたが、このような異所性発現は、体内由来の卵巣およびFBSとICIを添加して培養した卵巣では認められなかった。以上より、エストロジェンシグナルの活性化は、卵胞形成以前の前顆粒膜細胞の分化および卵母細胞シストの崩壊遅延を引き起こすことが示され、これらによって卵胞形成が阻害されること、また、生体において卵胞が形成される際もエストロジェンシグナル抑制機構が働く可能性が示唆された。
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