| 研究課題/領域番号 |
01015091
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
村松 喬 鹿児島大学, 医学部, 教授 (00030891)
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| 研究分担者 |
友村 美根子 鹿児島大学, 医学部, 助手 (30217559)
松原 修一郎 鹿児島大学, 医学部, 助手 (60199841)
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| キーワード | レチノイン酸 / 成長因子 / ヘパリン / 分化誘導 / 胚性腫瘍細胞 / テラトカルシノーマ / 胚発生 / 脱がん |
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| 研究概要 |
胚性腫瘍細胞をレチノイン酸によって分化誘導した時に発現が増強するcDNAクローンMKおよびその遺伝子について研究を進めた。MK遺伝子の5′上流2キロベースをクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)遺伝子につなぎ、胚性腫瘍細胞F9に導入すると、CAT活性がレチノイン酸によって誘導されるようになった。分化誘導の条件を変えた時に、MK遺伝子の発現は同様に起り、分化の方向性とMK遺伝子の発現の間に強い相関は認められなかった。レチノイン酸を培地から取り除くとMK遺伝子の発現は制えられ、レチノイン酸とレセプターの複合体がMK遺伝子の発現を直接制御している可能性が強い。MKcDNAをbetaーアクチンとウス肉腫ウイルスのプロモーターにつなぎ、L細胞に導入した。すると細胞外にMKポリペプチドが分泌され、MKポリペプチドは分泌タンパク質であることが判明した。また、ヘパリンアガロースカラムクロマトグラフィーの結果、MKポリペプチドはヘパリン結合能があることが判明した。ヘパリンを添加することにより、MKポリペプチドは安定化し、レチノイン酸処理した胚性腫瘍細胞の培地に分泌されていることも確認できた。以上のように、MKポリペプチドは成長因子と類似の性質を示す分子であり、細胞分化の制御に深くかかわっていると示唆された。MKポリペプチドの機能を直接的に検証するために、MKcDNAを導入したL細胞が分泌するMKポリペプチドを、CMセファデックス、フェニルセファロース、ヘパリンアガロースのカラムクロマトグラフィーを組み合せて、タンパク質としてかなりの純度まで精製した。
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