ヒト癌におけるalternative splicingの脱制御の検証

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01015108
• 研究機関: 藤田保健衛生大学
• 研究代表者: 関口 清俊 藤田学園保健衛生大学, 医学部, 講師 (50187845)
• 研究分担者: 広橋 説雄 国立がんセンター研究所, 病理部, 室長 (70129625) ; 小山 文隆 藤田学園保健衛生大学, 医学部, 助手 (40194641)
• キーワード: 細胞外基質 / フィブロネクチン / RNAスプライシング / 癌胎児性変化 / 肝細胞癌 / 肺癌 / 腎癌

研究概要

1.ヒト肝細胞癌におけるフィブロネクチンmRNA前駆体の3可変領域(EDーA、EDーB、IIICS)でのalternative splicingのパターンをヌクレアーゼプロテクション法により検討した。その結果、EDーA領域だけでなく、EDーB、IIICS領域でのalternative splicingも癌胎児性の制御をうけていることが判明した。特に、EDーB領域の場合、EDーB^+ mRNAは正常肝、非癌肝(肝硬変、慢性肝炎)では発現しておらず、胎児肝と悪性度の高い肝細胞癌でのみ、高い発現が認められた。悪性度の高い肝細胞癌の多くは、EDーA^+ mRNA、EDーB^+ mRNAのどちらも発現が増加していたが、中にはEDーA^+ mRNAだけ、あるいはED-B^+ mRNAだけが増加している症例があり、このようなED領域でのalternative splicingのパターンの違いが予後とどのように関係しているかは、今後の検討課題である。
2.フィブロネクチンmRNA前駆体のalternative splcingの脱制御が、肝細胞癌以外の癌でも起こっているかどうかを、肺癌と腎癌について検討した。肺癌の場合、EDーA^+ mRNAの発現率の有意な増加は観察されなかったが、EDーB^+ mRNAの発現は、組織型を問わず、調べたすべての症例で増加していた。一方、腎癌の場合は、EDーA^+ mRNA、EDーB^+ mRNAのどちらの発現も非癌組織と有意な差が認められなかった。このように、フィブロネクチンmRNA前駆体のalternative splicingは、組織特異的、かつ、部位特異的な癌性修飾をうけることが明かとなった。
3.EDーBペプチドを特異的に認識する単クローン抗体を作成することに成功した。この抗体を用いることにより、種々の癌組織におけるEDーB^+ mRNAの発現を免疫組織化学的に検索することが可能となった。

研究成果

• [文献書誌] F.Oyama,et al.: "Patterns of alternative splicing of fibronectin preーmRNA in human adult and fetal tissues." Biochemistry. 28. 1428-1434 (1989)
• [文献書誌] K.Sekiguchi,et al.: "Probing molecular polymorphism of fibronectins with antibodies directed to the alternatively spliced peptide segments" Biochemistry. 28. 3293-3298 (1989)
• [文献書誌] F.Oyama,et al.: "Deregulation of alternative splicing of fibronectin preーmRNA in malignant human liver tumors" Journal of Biological Chemistry. 264. 10331-10334 (1989)
• [文献書誌] M.Katayama,et al.: "Isolation and characterization of two monoclonal antibodies that recognize remote epitopes on the cellーbinding domain of human fibronectin" Experimental Cell Research. 185. 229-236 (1989)
• [文献書誌] F.Oyama,et al.: "Oncodevelopmental regulation of the alternative splicing of fibronectin premessenger RNA in human lung tissues" Cancer Research. 50. (1990)
• [文献書誌] 関口清俊: "フィブロネクチンの分子多様性とがん性変化" 生化学. 61. 89-93 (1989)