家畜の抗病性品種作出に関する分子生物学的基礎研究

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01440017
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 波岡 茂郎 北海道大学, 獣医学部, 教授 (10002297)
• 研究分担者: 林 正信 北海道大学, 獣医学部, 助教授 (10130337) ; 笠井 憲雪 北海道大学, 医学部, 助教授 (60001947) ; 田口 文広 国立精神センター, 神経研究所・モデル開発部, 室長 (30107429) ; 喜田 宏 北海道大学, 獣医学部, 助教授 (10109506) ; 橋本 信夫 北海道大学, 獣医学部, 教授 (60082103)
• キーワード: トランスジェニック動物 / アンチセンスRNA / ウイルス低抗性 / マウス肝炎ウイルス / ヌクレオチソキャプシドタンパク質 / 分子生物学 / 家畜

研究概要

本研究は、ウイルスの増殖に必要な遺伝子に対するアンチセンスRNAを発現するトランスジェニック動物を作製し、当該ウイルス低抗性品種の作出に関して検討することを目的としている。今年度は以下のような結果を得た。
1)昨年度マウス肝炎ウイルス(MHV)のヌクレオキャプシドタンパク質(Nc)の遺伝子に対してアンチセンスRNAを発現するベクタ-を受精卵に導入して得たトランスジェニックマウスについて家系を作製した。導入した遺伝子は、メンデルの法則に従って伝達されていることが確認されると共に当該遺伝子についてホモの個体を得た。また、RTーPCR法を用いてこれらの個体において肝臓や肺など各種臓器において当該アンチセンスRNAが発現していることを確認した。現在これらのトランスジェニックマウスについて、微生物学的クリ-ニングを行うと共に感染実験の準備を行っている。2)MHVはその複製過程においてポジテイブおよびネガテイブの両鎖が生じ各々役割を果している。Nc遺伝子に対するアンチセンスおよびセンスRNAを発現する形質転換細胞を作製し、MHVの増殖に対するこれら両RNAの効果を検討した結果、両RNA共ウイルスの増殖を阻害することが示され、MHVのようなポジテイブ一本鎖RNAウイルスの場合、センスRNAを発現させることによってもウイルス増殖の阻害が起こることが明らかとなった。更に、ウイルス増殖の阻害効率が当該RNAの核から細胞質への輸送効率や細胞質中での安定性に依存していることが示された。また、これらの性質が、生成されたRNAの構造に起因していることも示唆され、得られた形質転換細胞がmRNAの核から細胞質への輸送機構やmRNAの細胞質中におけるカイネテイックスを検討する上でも重要な解析系となることが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Hayashi,M.: "Nucleosomal structure of Marek's disease virus genome in transformed lymphoblastoid cell lines,MDCCーMSB1 and MDCCーRP1." Microbiol.lmmunol.35. 643-653 (1991)
• [文献書誌] Hayashi,M.: "Exposure of pSV2ーneo plasmid DNA to Xーrays enhances its ability to transform mouse DBT cells." J.Vet.Med.Sci.53. 941-943 (1991)
• [文献書誌] Kawamura,M.: "The inhibitory effects by oligonucleotide complementary to Marek's disease virus mRNA transcribed from BamHIーH region on the proliferation of transformed lymphoblastoid cells.MDCCーMS1." J.Gen.Virol.72. 1105-1111 (1991)
• [文献書誌] Yamashita,T.: "Unidirectional distribution of mosaicism in chimeric rats." Lab.Anim.Sci.42. (1992)
• [文献書誌] Matsubara,Y.: "Neurovirulence of six different murine coronavirus JHMV variants for rats." Virus Res.20. 45-58 (1991)
• [文献書誌] Kato.K.: "Evaluation of serum used in mouse splenic cell culture for interferon production Staphylococcal Endotoxin A." Immunol.Infect.Diseases. 1. 95-98 (1991)
• [文献書誌] Nagayama,S.: "Occurrence of autoimmune antibodies to liver microsomal proteins in association with fulminat hepatitis in the LEC strain of rats." Biochem.Biophys.Res.Comm.179. 1134-1140 (1991)
• [文献書誌] Miyoshi,I.: "Useful shortーrange transport of mouse embryo by means of nonfreezing technique." Lab.Anim.Sci.42. (1992)
• [文献書誌] 岩城 隆昌: "動物実験について考えるー国立村山病院の事件をめぐって 4.医学および生物学等の研究に用いられるイヌ:現状と将来像" アニテックス. 3. 633-639 (1991)
• [文献書誌] 笠井 憲雪: "キメララットの作製と応用" 臨床科学. 27. 627-632 (1991)
• [文献書誌] Yasuda,J.: "Molecular evidence for a role of domestic ducks in the introduction of avian H3 influenza viruses to pigs in suthern China,where the A/Hong Kong/68(H3N2)strain emerged." J.Gen.Virol.72. 2007-2010 (1991)
• [文献書誌] Sato,C.: "Cloning and antigenic expression of two genes from Chlamdia psittaci avian strain." FEMS Microbiol.Lett.80. 201-206 (1991)
• [文献書誌] Sato,C.: "Nucleotide sequence of a gene encoding a new genus specific protein of Chlamydia psittaci." Jpn.J.Vet.Res.39. 159-165 (1991)
• [文献書誌] Sato,C.: "Characterization of DNA fragment from Chlamydia psittaci avian strain which shows higher homology with HypB gene of Chlamydia." Jpn.J.Vet.Res.39. 167-177 (1991)
• [文献書誌] Kasai,N.: "The LEC rats:A new model for hepatitis and liver cancer.Reproductive performance and effects of pregnancy on the acute phase of hepatitis in LEC rats." SpringerーVerlag, 11-19 (1991)
• [文献書誌] 笠井 憲雪: "新生化学実験講座19 実験動物法 キメラ動物、ラット" (東京化学同人), 330-360 (1991)