ヒトヘルペスウイルスー6(HHVー6)のウイルス学的分子生物学的研究

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01440032
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 山西 弘一 大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (10029811)
• 研究分担者: 倉田 毅 国立予防衛生研究所, 部長 (50012779) ; 早川 安彦 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (60144523) ; 白木 公康 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (50135745)
• キーワード: HHVー6 / 突発性発疹 / DNAクロ-ニング

研究概要

(1)本年はHHVー6の定量法を確立しHHVー6中和抗体の測定が可能となった。HHVー6は末梢血ではCD4T細胞で主として増殖するので継代細胞でもCD4^+のT細胞系でウイルスの増殖を確めた結果MTー4細胞で一番増殖のよいことが判明した。そこでMTー4細胞をポリLリジンを用いガラス上に吸着してHHVー6のtitrationを行った。又中和抗体検索もこの方法で行えることを見出した。(2)HHVー6DNAのクロ-ニング:HHVー6DNAをヌクレオカプシッドより精製し制限酵素PstI、KpnI、EcoRI、BamHIで切断しプラスミッドpUC19に組み込みクロ-ニングを行った。現在全てのクロ-ンを採取すべく行っている。一方HHVー6の株間の差異を解析する目的で我々の分離した多くの株とタイ、米国、ヨ-ロッパで分離された株のDNAを精製し制限酵素で切断し解析した結果切断部位に数多くの相違が見いだされた。(3)ウイルスタンパクの解析:まずHHVー6橋本株をヒト臍帯血に感染させ〔^<35>S〕メチオニンでラベルし感染細胞上清よりウイルス粒子を精製した。更に粒子をdetergentで処理しポリアクリルアミドゲル電気泳動で分析した結果ウイルス粒子には少くとも29種のポリペプチド(分子量280,000〜30,000)が見いだされそのうち6種がウイルスエンベロ-プに存在した。次にHHVー6に特異酵素の誘導について解析した。その結果ウイルス特異チミジンキナ-ゼは検出されなかったがウイルス特異DNAポリメラ-ゼは検出されヘルペスウイルスDNAポリメラ-ゼの活性阻害剤であるホスホノ酢酸でその活性が阻害された。続いてモノクロ-ン抗体の作製とウイルスタンパクの解析を行った。多くの抗体が作製されそのうち本年はウイルス糖タンパクであるgp94Kに対する抗体を用いてその細胞内でのprocessingを検索した。又この抗体はウイルス中和能を有していたのでgp94Kは中和のエピト-プを有していることが判明し免疫学的にも重要な糖タンパクであることを見いだした。

研究成果

• [文献書誌] Balachandra,K.,Ayuthaya P.I.,Auwanit,W.,Okuno,T.,Yamanishi,K.,Takamashi,M.: "Prevalence of antibody to human herpesvirus 6 in women children." Microbiol.Immunol.33. 515-518 (1989)
• [文献書誌] Okuno,T.,Takahashi,K.,Balacmandra,K.,Shiraki,K.,Yamanishi,K.,Takahashi,M.,Baba,K.: "Seroepidemiology of human herpesvirus 6 infection in normal children and adults." J.Clin.Virol.27. 651-653 (1989)
• [文献書誌] Shiraki,K.,Okuno,T.,Yamanishi,K.,Takahashi,M.: "Phosphonoacetic acid inhibits replication of human herpesvirus-6." Sntiviral Research. 12. 311-318 (1989)
• [文献書誌] Shiraki,K.,Okuno,T.,Yamanishi,K.,Takahashi,M.: "Virion and nonstructural polypeptides of human herpesvirus-6." Virus Research. 13. 173-178 (1989)
• [文献書誌] Takahashi,K.,Sonoda,S.,Higashi,K.,Kondo,T.,Takahashi,H.,Takahashi,M.,Yamanishi,K.: "Predominant CD4 T-lymphocyte tropism of human herpesvirus 6-related virus." J.Virol.63. 3161-3163 (1989)
• [文献書誌] Asada,H.,Yalcin,S.,Balachandra,K.,Higashi,K.,Yamanishi.,K.: "Establishment of titration for human herpesvirus 6 and evaluation of neutralizing antibody response to the virus." J.Cl.n.Microbiol.27. 2204-2207 (1989)