ヒトヘルペスウイルスー6(HHVー6)のウイルス学的分子生物学的研究

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01440032
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 山西 弘一 大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (10029811)
• 研究分担者: 倉田 毅 国立予防衛生研究所, 部長 (50012779) ; 奥野 寿臣 大阪大学微生物病研究所, 助手 (10221152)
• キーワード: HHVー6 / 突発性発疹 / DNAクロ-ニング

研究概要

(1)HHVー6の遺伝子地図の作製:昨年に引き続きHHVー6のDNAを各種制限酵素(PstI EcoRI、KpnI,HindIII)で切断しpUC19に挿入しクロ-ニングを行った。現在約156kpbのDNAのうち約70kbpの切断DNAの位置が決定された。又そのうち約22kpbクロ-ンはmajor capsid proteinをコ-ドしていることが判明しその一部をシ-クエンスしPolymerase Chain Reaction用のprimer及びサザンブロット用のprobeが作製され臨床材料のHHVー6DNA検索に役立てた(J.Clin.Microbiol.1990)。更にこの手法を用いて患者血中及び健康成人血中のHHVー6の存在、潜伏感染の検討を行った。その結果HHVー6は感染急性期にはリンパ球及び単球成分に見出されるが、回復期並びに成人血中では単球にHHVー6が存在し潜伏感染する可能性が示唆された。
(2)HHVー6抗原に対する単クロ-ン抗体の作製とウイルス糖タンパクの解析:HHVー6感染抗原をマウスに免疫し種々の単クロ-ン抗体を作製した。現在6コの単クロ-ン抗体が採取でき、そのうち2種の糖タンパクに対する単クロ-ン抗体を得ることができHHVー6糖タンパクの免疫学的活性並びに糖タンパクの感染細胞内の合成について解析した。その結果、単クロ-ン抗体OHV3は分子量98,000及び92,000のタンパクと反応し高い中和能を有していた。又糖はNーlinkedの高マンノ-ス型であった。更にpulseーchaseテストでこのタンパクは分子量75,000のタンパクに糖鎖が付加されて成熟タンパクになることを明らかにした。現在更に他の糖タンパクについても解析中である。

研究成果

• [文献書誌] T.Okuno,K.Higashi,K.Shiraki,K.Yamanishi,M.Takahashi,K.Baba,H.Yabuuchi,T.Kurata: "Human herpesvirus 6 infection in renal transplantation." Transplantation. 49. 519-522 (1990)
• [文献書誌] K.Kondo,Y.Hayakawa,H.Mori,S.Sato,T.Kondo,K.Takahashi,Y.Minamishima,M.Takahashi,K.Yamanishi: "Detection by polymerase cha^^¨in reaction amplification of human herpesvirus 6 DNA in peripheral blood of patients with exanthem subitum patients." Journal of Clinical Microbiology. 28. 970-974 (1990)
• [文献書誌] T.Okuno,H.Shao,H.Asada,K.Shiraki,M.Takahashi,K.Yamanishi: "Analysis of a glycoprotein of human herpesvirus 6 (HHVー6) using monoclonal antibodies." Virology. 176. 625-628 (1990)
• [文献書誌] S.Kido,K.Kondo,T.Kondo,T.Morishima,M.Takahashi,K.Yamanishi: "Detection of human herpesvirus 6 DNA in throat swabs by polymerase chain reaction." Journal of Medical Virology. 32. 139-142 (1990)
• [文献書誌] N.Ishiguro,S.Yamada,T.Takahashi,T.Okuno,K.Yamanishi: "Meningoーencephalitis associated with HHVー6 related exanthem subitum." Acta Pediatrics Scandinabia. 79. 987-989 (1990)
• [文献書誌] Y.Asano,T.Yoshikawa,S.Suga,T.Yazaki,K.Kondo,K.Yamanishi: "Fatal fulminant hepatitis in an infant with muman herpesvirus 6 infection." Lancet. 1. 862-863 (1990)
• [文献書誌] K.Yamanishi,T.Kondo,K.Kondo,Y.Hayakawa S.Kido,K.Takahashi,M.Takahashi: "Immunobiology and prophylaxis of human herpesvirus infections." Prenum Press,New York, (1990)