高血圧の発現機序と予後因子の分子.遺伝子レベルにおける検討

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01440043
• 研究機関: 大阪市立大学
• 研究代表者: 武田 忠直 大阪市立大学, 医学部, 教授 (50010129)
• 研究分担者: 田辺 和裄 大阪工業大学, 助教授 (40047410) ; 根来 伸夫 大阪市立大学, 医学部, 助手 (80180701) ; 河野 雅和 大阪市立大学, 医学部, 助手 (20153489) ; 金山 良春 大阪市立大学, 医学部, 講師 (60106341)
• キーワード: 高血圧自然発症ラット(SHR) / WKYラット / プロティンキナ-ゼC / ホスホリパ-ゼC / 遺伝子クロ-ニング / Restriction fragment length polymorphism(RFLP)

研究概要

(1)高血圧とプロティンキナ-ゼCとの関連について
昨年度の研究で高血圧と自然発症高血圧ラット(SHR)の血小板プロティンキナ-ゼC(PKC)とは密接な関連をもつことが認められたが,今年度はSHRの大動脈平滑筋におけるPKCと血圧との関連について検討した。12週令のSHR大動脈平滑筋細胞質のPKC活性は同週令のWKYラットに比して有意に上昇していた(P<0.01)。この上昇していたPKC活性は降圧薬エナラプリル(25mg1kg)を2週間投与した同週令のSHRではWKYと同程度に低下することを認めた。血圧と大動脈PKC活性との間にはr=0.84の高い正相関を認めた。この関係はDEAEクロマトグラフィ-で標品を部分精製しても同様であった。膜分画のPKC活性はSHRにのみ認められた。RKCのα,β型に特異的なモノクロ-ナル抗体を用いPKC蛋白の半定量をイムノブロットを行い検討したがSHRでWKYに比し有意に増加し,エナラプリル治療群ではWKY程度に低下していた。これらの結果よりSHR大動脈のPKC活性,含量は血圧と密接に関連していることが明らかとなった。
2)フォスフォリパ-ゼC(PLC)の遺伝子レベルでの変異について
ラットのPLCーα,β,γ_1,γ_2,δのそれぞれのCDNAをPCRを用いてダイレクトクロ-ニングを行いプロ-ブとして使用した.SHRとWKYより得たDNAについてRFLPを検討した所,PLCーα,γ_2には差を認めなかったが,PLCーγ,β,δについてはSHRとWKYの間にRFLPを認め,これらの遺伝子あるいはその近傍にSHRとWKYの間には変異が生じていることが示唆された.

研究成果

• [文献書誌] Kanayama,Y.Inariba,H.Takaori,K.Itoh,S.Takeda T.: "Incneased phosphorylation of myosim light chain in platelets of spontaneously hypertensine rats." Hypertension. 12. 356 (1988)
• [文献書誌] Takaori K.Inariba H.Itoh S.Inoue T.Kanayama Y.Takeda T.: "Chronic antihypertensive drug treatment decreases Protein kinase C activity in plateles from SHR." Clinical & Experimental Hypertension. A12. 1063-1075 (1990)
• [文献書誌] Kanayama Y,Takaori K,Inariba H,Negoro N,Inoue T,Takeda T.: "Hypotensive treatment modulates phosphorylation of myosin light chain in platelets of spontaneously hypertensive rats" Circulation. 80. II22 (1989)
• [文献書誌] Negoro N,Kanayama,Y,Inariba H,Okamura M,Inoue T,Takeda T.: "Endothehin modulated cーmyc protooncogene expression in cultussl aortic smooth muscle cells from spontaneously hypertensive rats." Hypertension. 14. 340-341 (1989)
• [文献書誌] Kanayama,Y.Inariba H,Negoro N,Okamura M,Inoue T,Takeda T.: "Blood pressure is associated with proteinkinase C activity in aortic smooth muscle cells from spontaneously hypertensive rats" circulation. 82. III-232 (1990)
• [文献書誌] Negoro N,Kanayama Y,Inariba H,Okamura M,Inoue T,Takeda T.: "Restriction fragment length polymorphisms for rat phospholipase Cーγ gene in spontaneously hypertensive rats." J.Hypertension. 8(sup13). S70 (1990)