多能性造血幹細胞の単離・増幅・保存と新しい臨床応用への発展

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01440049
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 三浦 恭定 自治医科大学, 医学部, 教授 (60048965)
• 研究分担者: 倉田 寛一 自治医科大学, 医学部, 助手 (90215038) ; 三輪 哲義 自治医科大学, 医学部, 講師 (40200224) ; 畠 清彦 自治医科大学, 医学部, 講師 (80192699) ; 小松 則夫 自治医科大学, 医学部, 助手 (50186798) ; 須田 年生 自治医科大学, 医学部, 講師 (60118453)
• キーワード: 造血幹細胞 / 造血因子 / モノクロ-ナル抗体 / CD34 / cーkit / WGA / 脾コロニ- / 抗白血病細胞抗体

研究概要

本年度の計画に従い,造血幹細胞の単離をすゝめ,単離した幹細胞が造血因子によりどのように性質を変化させて行くかを検討した.
1)マウス造血幹細胞はwheat germ agglutinin陽性,各系血統マ-カ-陰性(WGA^+Lin^-)の分画に約130倍濃縮された.5FU処理をして成熟造血細胞を除去したマウス脾細胞のWGA^+Lin^-分画にはILー3に反応してコロニ-を作る未分化な幹細胞(脾コロニ-形成細胞CFUーS等)を含んでいた.
2)cーkit遺伝子産物は,未分化な幹細胞に働くstem cell factorの受容体として注目される.マウスcーkitに対するモノクロ-ナル抗体(ACKー2)を入手し幹細胞上の表現を調べたところ,WGA^+Lin^-細胞分画にcーkit^+細胞が多く含まれていることがわかった.細胞分離装置で集めたWGA^+Lin^-cーkit^+Thy1 low細胞分画では2ケに1ケが顆粒球マクロファ-ジコロニ-形成細胞であり,4ケに1ケがCFUーSであった.またこの抗体の注射により脾コロニ-形成を抑制した.
3)未熟なヒト幹細胞に表現されるCD34^+CD33^-細胞はILー3またはGーCSFの存在下でCD34^-CD33^+細胞が一旦出現し,その後ILー5又はGーCSF添加により好酸球または好中球へと分化することがわかった.
4)濃縮したヒト幹細胞の臨床応用の基礎的検討として新たにCD34に対するモノクロ-ナル抗体を作成し,その機能をしらべたところ,細胞分離装置によって幹細胞を約100倍濃縮できることがわかった.この抗体は大量入手出来るので,骨髄移植に応用できると考えている.
5)ヒト抗白血病細胞モノクロ-ナル抗体を数種入手し,正常CD34陽性細胞には反応せず,患者より採取した急性骨髄性白血病には反応する事を突止めた.腫瘍細胞を除去した自己骨髄移植に応用の可能性がある.
以上研究は新しい展開をみせ乍ら進んでおり,次年度これらをまとめた集大成が出来るものと思われる.

研究成果

• [文献書誌] Ema,H.,Suda,T.,Miura,Y.,Nakauchi,H.: "Colony formation of cloneーsorted human hematopoietic progenitors." Blood. 75. 1941-1946 (1990)
• [文献書誌] Suda,T.,Ohara,A.,Suda,J.,Okada,S.,Tokuyama,N.,Miura,Y.: "Early B cell differentiation from hematopoietic stem cells in the presence of stromal cells and interleukinー7 (ILー7)." “Experimental Hematology Todayー1989"Gorin NC,Douay L (eds) springerーVerlag,New York,USA. 45-52 (1990)
• [文献書誌] Yamaguchi,Y.,Suda,T.,Suda,J.,Eguchi,M.,Miura,Y.,Mita,S.,Hitoshi Y.,Tominaga,A.,Takatsu,K.: "Analysis of eosinophilーpredominant colonies formed by human hemopoietic precursor cells in the presence of purified interleukinー5." Acta Haematologica Japonica. 53. 688-698 (1990)
• [文献書誌] Yamaguchi,Y.,Matsui,T.,Kasahara,T.,Etoh,S.,Takatsu,K.,Miura,Y.,Suda,T.: "In vivo changes of hemopoietic progenitors and the expression of the interleukin 5 gene in eosinophilic mice infected with toxocara canis." Exp.Hematol.18. 1152-1157 (1990)
• [文献書誌] Ema,H.,Suda,T.,Nagayoshi,K.,Miura,Y.,Civin,C.I.,Nakauchi,H.: "Target cells for granulocyte colonyーstimulating factor,interleukinー3,and interleukinー5 in differentiation pathways of neutrophils and eosinophils." Blood. 76. 1956-1961 (1990)
• [文献書誌] Okada,S.,Suda,T.,Tokuyama,N.,Nagayoshi,K.Miura,Y.,Nakauchi,H.: "Effects of interleukin 3,interleukin 6,and granulocyte colonyーstimulating factor on sorted murine splenic progenitor cells." Exp.Hematol.19. 42-46 (1991)
• [文献書誌] Miura,Y.,Komatsu,N.,Suda,T.: "(Molecular biology and differentiation of megakaryocytes) Growth and differentiation of two human megakaryoblastic cell lines;CMK and UTー7" WileyーLiss,New York, 12 (1990)
• [文献書誌] 三浦 恭定編: "造血因子研究の潮流" 中外医学社, 272 (1991)