| 研究課題/領域番号 |
01440084
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| 研究機関 | 北里大学 |
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研究代表者 |
井村 伸正 北里大学, 薬学部, 教授 (70012606)
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| 研究分担者 |
田中 聡子 北里大学, 薬学部, 助手 (40188313)
姫野 誠一郎 北里大学, 薬学部, 助手 (20181117)
豊田 春香 北里大学, 薬学部, 助手 (10197973)
瀬子 義幸 北里大学, 薬学部, 講師 (60133360)
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| キーワード | メタロチオネイン / ス-パ-オキシドジスムタ-ゼ / グルタチオンペルオキシダ-ゼ / カタラ-ゼ / 活性酸素 / フリ-ラジカル除去因子 / 特定遺伝子増幅細胞 |
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| 研究概要 |
1、平成元年度に得たマウスカタラ-ゼ(CL)cDNAを有するファ-ジより当該cDNAを精製し、その全塩基配列を決定した。さらにこのcDNAをSV40プロモ-タ-或いはSRαのプロモ-タ-(SV40プロモ-タ-及びHTLV由来のRーU5セグナントを含む)の下流に連結したrecombinant DNAを構築した。これをヒト由来HeLa細胞にgene transfection法により導入し、高CL活性を示す細胞株を作製することに成功した。現在、通常よりも4倍程度CL活性の高い細胞株を得ているが、さらに数段階の異なる活性を有する細胞株をスクリ-ニング中である。2、マウスス-パ-オキシドジスムタ-ゼ(SOD)cDNAについても1同様の手法を用いて高SOD活性を示す細胞株を作製することが出来た。現在のところ通常より約1.5倍活性の高い細胞株を得ており、さらに数段階の異なる活性を有するtransformantのスクリ-ニングを行っている。3、マウスメタロチオネイン(MT)及びグルタチオンペルオキシダ-ゼ(GSHーPx)cDNAについても1、2、同様の方法により高MT含量並びに高GSHーPx活性を示す株を作製することを試みた。DNAを導入した細胞においてMTまたはGSHーPx mRNAが強く発現していることを確かめることが出来た。しかしながらMT蛋白或いはGSHーPx酵素蛋白の増加は認められなかった。種々検討の結果、GSHーPxの場合にはrecombinant DNAの構造上の欠陥が推定され、現在この点を改善するため当該cDNAをプロモ-タ-の直下に連結する実験を行っている。MTcDNAについては蛋白合成の制御に重要と考えられるその5'及び3'non coding領域を除去した新たなrecombinant DNAを構築し同様の実験を行ったがMT蛋白の増加は認められなかった。そこで宿主細胞をマウス由来のL細胞に変えてgene transfectionを行い、得られたtransformantについて現在MT蛋白の発現量を検討中である。
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