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ホヤ胚における筋肉細胞分化の分子メカニズムを、(1)筋肉細胞で特異的に発現する構造遺伝子、(2)これら筋特異的遺伝子の発現を制御する上位の調節遺伝子、(3)分化の決定に関与する細胞質因子、の三方向から解析することを目標として研究を進めている。
1.筋肉細胞特異的遺伝子:すでに我々はミオシン重鎖のcDNAの単離に成功し、これをプロ-ブとした研究からこの遺伝子の発現が嚢胚期から予定筋肉細胞でのみ起こることを明らかにしていた。本年度は、マボヤの筋肉アクチンのcDNAプロ-ブを得ることに成功した。得られたマボヤ胚アクチンcDNAの塩基配列の解析などから、この種では少くとも数種類のアクチン遺伝子転写産物が尾芽胚に存在することがわかった。それらの中の一つ筋肉アクチンは、ミオシン重鎖と同様に、嚢胚期から予定筋肉細胞でのみ発現する。現在、筋肉アクチンのジェノミックDNAの単離を始めようとしている。
2.上位の調節遺伝子:この候補として哺乳類のMyoD様遺伝子を考え、そのcDNAライブラリ-からの単離を試みたがうまくいかなかった。現在ジェノミックライブラリ-からの単離を試み、10個程のクロ-ンを得てその解析を急いでいる。
3.分化決定因子:分化決定因子を含むと考えられているマイオプラズムの構成成分を特異的に認識するモノクロ-ナル抗体をすでに得ており、特にマイオプラズミン-C1と名付けた、分子量約40KDaの抗原分子は筋分化に関与しているらしいという実験結果を得ている。本年度は、マイオプラズミン-C1をコ-ドする約1KbのcDNAを単離し、その塩基配列を決定したが、既知の遺伝子との類似性は発見できなかった。マイオプラズミン-C1の転写産物は約3Kbと思われるので、現在残りの2Kbをカバ-するcDNAクロ-ンの単離をすすめている。
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