1990 年度実績報告書

部位特異的組換え系を用いた染色体工学技術の開発

研究課題

研究課題/領域番号	01480064
研究機関	大阪大学
研究代表者	大嶋泰治大阪大学, 工学部, 教授 (20029242)
研究分担者	原島俊大阪大学, 工学部, 助教授 (70116086)
キーワード	染色体工学 / 部位特異的組換え / 異数体構築 / 酵母
研究概要	これまでに、酵母の染色体上に大きな欠失と逆位の造成、また相互組換えによる2本の非相同染色体間の組換えに成功した。今年度は大きなDNA分子の染色体への挿入と、一染色体二倍体細胞の造成を試みた。大分子量DNAの染色体挿入は現在実験中であるが、一染色体細胞の造成には以下の如く成功した。第IV染色体には、センロメア(<CEN4>___ー)を挟んで左腕に<PHO2>___ーと<HO>___ー、右腕に<TRP1>___ーと<PHO80>___ー遺伝子座がある。NBW5株(<MAT>___ーα <his3>___ー <leu2>___ー <trp1>___ー <ura3>___ー <ade2>___ー <pho3>___ー)について、一般第IV染色体との区別を可能とするため、その<PHO2>___ー座に<LEU2^+>___ー遺伝子、<PHO80>___ー座に<URA3^+>___ー遺伝子を組み込み、さらに<CEN4>___ー近傍配列ー特異的組換え部位(RS)ー<CEN4>___ーー<HIS3>___ーーRSー<CEN4>___ー近傍配列を連結した雑種DNA分子を構築し、これを上記の改変NBW5株セントロメア部と置き換えた。一方、NBW5株とは接合型のみ異なる同質遺伝子系統株のNBW6株に、特異的組換え酵素(R)をガラクト-ス存在下で生産することが出来るプラスミド(プラスミド符号<TRP1>___ー)を導入しておき、これらの操作を加えられたNBW5株とNBW6株を接合させて二倍体とした。この二倍体をガラクト-ス栄養培地中で約20時間培養することにより、細胞集団の80%がHis^ー Leu^ー Ura^ー Trp^+の形質を示すことを認めた。His^ー Leu^ー Ura^ー形質への変化は同時に起こり、<CEN4>___ー構築体を挿入した染色体が培養中に高頻度で脱落することを示す。これはグラクト-ス培地で培養するころにより、RS部の組換えによりまず挿入された<CEN4>___ー構築体からセントロメア部が脱落し、以後の細胞増殖中にその第IV染色体全体が失われるからである。この結論はHis^ー Leu^ー Ura^ー株の染色体を電気泳動で分別し、数種の第IV染色体DNAをプロ-ブとして、さきに<LEU2>___ー、<HIS3>___ー <URA3>___ー遺伝子DNAを挿入した第IV染色体の存在を検出したが、その欠片も認められなれず、NBW6株に由来する正常な第IV染色体のみであることからも支持された。

研究成果
(5件)

すべてその他

すべて文献書誌 (5件)

[文献書誌] H.Matsuzaki,R.Nakajima,J.Nishiyama,H.Araki,and Y.Oshima: "Chromosome engineering in <Saccharomyces>___ー <cerevisiae>___ー by using a sitespecific recombination system of a yeast plasmid" Journal of Bacteriology. 172. 610-618 (1990)
[文献書誌] H.Kawasaki,H.Matsuzaki,R.Nakajima,and Y.Oshima: "The PHO80/TUP7 locus in Saccharomyces cerevisiae is on the left arm of chromosome XV:mapping by chromosome engineering" Yeast.
[文献書誌] 大嶋泰治・原島俊・松崎浩明・小川暢男・林直之: "(分担)酵母の分子生物学的技法" 蛋白質核酸酵素共立出版(株) 遺伝子操作1990 高浪満・木村光編集. 36. 2523-2541 (1990)
[文献書誌] 松崎浩明・大嶋泰治: "酵母のニュ-バイオテクノロジ- (分担)酵母における染色体改変技法多機能酵母の開発から染色体工学まで (324ー331頁)" 秋山裕一監修 (財)バイオインダストリ-協会編集 (株)医学出版センタ-:, 344 (1990)
[文献書誌] Y.Oshima,H.Araki,and H.Matsuzaki: "Methods in Molecular Biology Volume 5ーTissue Culture Techniques (分担) Chromosome engineering in yeast with a siteーspecific recombination system from a heterologous yeast plasmid" Bestseller(Editors:J.M.Walker and J.W.Pollard),

1990 年度 実績報告書

部位特異的組換え系を用いた染色体工学技術の開発

研究代表者

大嶋 泰治 大阪大学, 工学部, 教授 (20029242)

研究成果

[文献書誌] H.Matsuzaki,R.Nakajima,J.Nishiyama,H.Araki,and Y.Oshima: "Chromosome engineering in <Saccharomyces>___ー <cerevisiae>___ー by using a sitespecific recombination system of a yeast plasmid" Journal of Bacteriology. 172. 610-618 (1990)

[文献書誌] H.Kawasaki,H.Matsuzaki,R.Nakajima,and Y.Oshima: "The PHO80/TUP7 locus in Saccharomyces cerevisiae is on the left arm of chromosome XV:mapping by chromosome engineering" Yeast.

[文献書誌] 大嶋 泰治・原島 俊・松崎 浩明・小川 暢男・林 直之: "(分担)酵母の分子生物学的技法" 蛋白質 核酸 酵素 共立出版(株) 遺伝子操作1990 高浪 満・木村 光 編集. 36. 2523-2541 (1990)

[文献書誌] Y.Oshima,H.Araki,and H.Matsuzaki: "Methods in Molecular Biology Volume 5ーTissue Culture Techniques (分担) Chromosome engineering in yeast with a siteーspecific recombination system from a heterologous yeast plasmid" Bestseller(Editors:J.M.Walker and J.W.Pollard),

1990 年度実績報告書

大嶋泰治大阪大学, 工学部, 教授 (20029242)

[文献書誌] H.Matsuzaki,R.Nakajima,J.Nishiyama,H.Araki,and Y.Oshima: "Chromosome engineering in <Saccharomyces>_ー <cerevisiae>_ー by using a sitespecific recombination system of a yeast plasmid" Journal of Bacteriology. 172. 610-618 (1990)

[文献書誌] 大嶋泰治・原島俊・松崎浩明・小川暢男・林直之: "(分担)酵母の分子生物学的技法" 蛋白質核酸酵素共立出版(株) 遺伝子操作1990 高浪満・木村光編集. 36. 2523-2541 (1990)