tーPAとPAインヒビタ-の結合様式の解明とそれに及ぼすフィブリンの影響の研究

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01480114
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 高田 明和 浜松医科大学, 医学部, 教授 (80092980)
• 研究分担者: 高田 由美子 浜松医科大学, 医学部, 助手 (90092981) ; 浦野 哲盟 浜松医科大学, 医学部, 助教授 (50193967)
• キーワード: プラスミノ-ゲンアクチベ-タ-インヒビタ- / 組織プラスミノ-ゲンアクチベ-タ- / ユ-グロブリン溶解時間

研究概要

プラスミノ-ゲンアクチベ-タ-インヒビタ-1(PAIー1)のcDNAをCHO細胞にtransfectして得た真核細胞のPAIー1(rePAIー1)とE.Coliを用いた原核細胞のPAIー1(rpPAIー1)を使用し、組織プラスミノ-ゲンアクチベ-タ-(tーPA)との反応を検討した。PAIー1を0.01%SDSで処理するとPAIー1はtーPA、uーPA(尿中プラスミノ-ゲンアクチベ-タ-)と安定な複合体を形成しなかった。一方0.1%SDSで処理するとtーPAはPAIー1と複合体を形成しないのみならず、この際新しいバンドはPAIー1より約5KD低く、reaction site ArgーMetで切断されたC末端側ぺプチドであることが示唆された。一方tーPAに対するPAIー1の抑制作用をしらべると、PAIー1は0.01%SDS存在下で抑制作用を低下させ、0.1%SDS存在下では全く抑制を示さなかった。PAIー1をcircular dichroism測定の結果、PAIー1はαヘリックスをほとんど含まないが、SDS処理の結果PAIー1はαヘリックス含量を増加しており、SDS処理がPAIー1の二次構造に変化を与えることを示していた。このことはPAIー1の高次構造の変化がPAIー1をinhibitorから基質に変えることを示し、酵素・基質反応の解析に有益なモデルになることを示していた。一方PAIー1の線溶系における意義をしらべるためユ-グロブリン溶解時間(ELT)を用いた。ELTはPAIー1の濃度との間に極めて高い正の相関を示し、血漿中の線溶能はそこにおけるPAIー1の量により決定されていることを示した。即ちPAIー1の量が多い場合はtーPAを不活化し、PAIー1の量が少ない場合は残っているactiveなtーPAがプラスミノ-ゲンを活性化することにより線溶がおこることが示された。

研究成果

• [文献書誌] Tetsumei URANO et al: "Effects of Nーterminal peptide of Gluーplasminogen on the activation of Gluーplasminogen and its conversion to Lysーplasminogen." Thrombosis Research. 61. 349-359 (1991)
• [文献書誌] Michal H.Pietraszek et al: "Alcoholーinduced depression:Involvement of serotonin." Alcohol&Alcoholism. 21. 155-159 (1991)
• [文献書誌] Tetsumei URANO et al: "Stimulation of the amidolytic activity of single chain tissueーtype plasminogen activator by fibrinogen degradation products:Possible fibrin binding sites on single chain tissueーtype plasminogen activator molecule." Biochimica Biophysica Acta. 1077. 245-252 (1991)
• [文献書誌] Hiroyuki KAWAMURA et al: "The effects of polysaocharides on plasminogen activator by single chainーand two chainーtissue plasminogen activator." Thrombosis Research. 62. 481-490 (1991)
• [文献書誌] Kenichi SUMIYOSHI et al: "Increase in levels of Plasminogen activator and typeーl plasminogen activator inhibitor in human breast cancer:Possible roles in tumor progression and metastasis." Thrombosis Research. 63. 59-71 (1991)
• [文献書誌] Yumiko TAKADA et al: "The activation by tーPAーPAIーl complex in the absence of fibrin." Thrombosis Research. 63. 169-177 (1991)
• [文献書誌] Michal H.Pietraszek et al: "Effect of alcohol ingestion on the fibrinolytic activity." Fibrinolysis. 5. 249-252 (1991)
• [文献書誌] Tetsumei Urano et al: "PAIーl plays an important role in the expression of tーPA activity in the euglobulin clot lysis by controlling the concentraion of free tーPA" Thrombosis and Haemostasis. 66. 474-478 (1991)
• [文献書誌] M.H.Pietraszek et al: "Fibrinolytic activity in depression and neurosis." Thrombosis Research. 63. 661-666 (1991)
• [文献書誌] M.H.Pietraszek et al: "Diurnal patterns of serotonin,5ーhydroxyindoleacetic acid,tryptophan and fibrinolytic activity in blood of depressive patients and healthy volunteers." Thrombosis Research. 64. 243-252 (1991)
• [文献書誌] Kenichi Sumiyoshi et al: "Plasminogen activator system in human breast cancer" Intetnational Journal of Cancer. 50. 345-348 (1991)
• [文献書誌] Akikazu TAKADA.,K.Tanaka(Ed。): "Recent Advances in Thrombosis and Fibrinolysis" Academic Press,Japan, 363(73-90) (1991)