Podocalyxinの構造と機能に関する薬理学的研究

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01480136
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 遠藤 仁 東京大学, 医学部(医), 助教授 (20101115)
• キーワード: Podocalyxin / 限外濾過 / 陰性荷電障壁 / Puromycin aminonucleoside / Streptozotocin / Stainsーall染色 / 単離糸球体

研究概要

平成2年度までに腎糸球体病態モデルにおけるpodocalyxinの病態生理学的意義を明らかにすることができたので、平成3年度にはpodocalyxinの構造解明と病態発症における役割の解析に向けて以下の実験を行った。
1)糸球体の単離と糖タンパクの可溶化。 ラット腎よりメッシュ法で糸球体を大量に単離し、0.2%Triton Xー100で可溶化した。この一部をSDS電気泳動とstains all染色でpodocalyxin存在を確認した。
2)WGA affinity column chromatographyによる部分精製。 前のステップ可溶化されたタンパクをWGAーsepharose 4Bと12時間4℃で反応させた後洗浄、Nーacetylーβーglucopyranosideで溶出させた。この分画をphosphotungstic acidで沈澱させ、acetoneで溶出を試みた。
3)ゲル濾過による精製 前のステップまでで数本の糖タンパクのバンドが得られており、podocalyxinも含まれていることは確認できたので、これ以降における単一バンドまでの精製を目下試している。最終的にはペプチドシ-ケンサ-分析に足る量の分取を目指している。以上の各段階での分取可能なタンパク質が限られているので、スタ-ティングマテリアルを増大させることに専念している。

研究成果

• [文献書誌] Endou,H.et al.: "Heterogeneity of nephron energy metabolism:Implications for response to hypoxic insult." Nephrology. 665-672 (1991)
• [文献書誌] Endou,H.et al.: "Role of ammonium ion in adenosine triphosphate consumption of the rat medullary thic ascending limb." Contr.Nephrol.92. 149-259 (1991)
• [文献書誌] Jung,K.Y.et al.: "A novel vasopressin receptor in rat early proximal tubule." Biochem.Biophys.Res.Commun.180. 131-137 (1991)
• [文献書誌] Endou,H.et al.: "Angiotensin II receptor subtypes in rat early proximal tubule." Contr.Nephrol.95. 190-196 (1991)
• [文献書誌] Endou,H.et al.: "Effect of mercuric chloride on angiotensin IIーinduced Ca^<++> transient in the proximal tubule of rats." Advances in Mercury Toxicology. 299-314 (1991)
• [文献書誌] Nosaka,K.et al.: "Cisplatinーinduced alterations in renal structure,ammoniagenesis and gluconeogenesis of rats." Kidney Int.41. 73-79 (1992)
• [文献書誌] Endou,H.et al.,eds.: "Molecular Aspects of Ammoniagenesis" Karger,Basel, 228 (1991)
• [文献書誌] Endou,H.et al.,eds.: "Cellular and Molecular Biology of the Kidney" Karger,Basel, 288 (1991)