刺激ー分泌連関:とくに細胞内カルシウムの作用と未知調節因子の探求

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01480140
• 研究機関: 徳島大学
• 研究代表者: 岡 源郎 徳島大学, 医学部, 教授 (60028298)
• 研究分担者: 石村 泰子 徳島大学, 医学部, 助手 (40035431) ; 森田 恭二 徳島大学, 医学部, 助教授 (50108883)
• キーワード: 刺激ー分泌連関 / Ca^<2+> / Ca^<2+>作用の調節 / 副腎クロマフィン細胞 / 細胞骨格成分 / プロテインキナ-ゼ / Ba^<2+>

研究概要

本研究は、神経系のモデルとしての意図も含め、副腎クロマフィン細胞を用い、刺激ー分泌(生合成)連関におけるCa^<2+>の動員機構、細胞内Ca^<2+>の作用などについて精査し、同時にこのCa^<2+>の作用をメディエ-トしている新しい調節因子の発見に努めるのを目的としている。
1.薬物作用からの解析:培養ウシ副腎クロマフィン細胞あるいはそのジキトニン処理膜透過性細胞を用い、ミオシン軽鎖リン酸化酵素(MLCK)の阻害薬が、各種の分泌刺激によるCa^<2+>の細胞内への流入を抑制し、その結果カテコ-ルアミン分泌を抑制することを明らかにし、MLCKは分泌細胞では細胞膜でのCa^<2+>の流入機構の調節にあづかっていることを明らかにした。またサイトカラシン、ビンブラスチンなど細胞骨格成分に働く薬物のカテコ-ルアミン分泌と生合成に対する作用から、アクチンなど細胞骨格成分が、チロシンの細胞内へのとり込みを促進し、チロシン水酸化酵素活性を調節し、同時にCa^<2+>に依存した分泌機構にも深いかかわり合いを持っていることを明らかにした。他方、各種フラボノイド類を用いた検索から、カテコ-ルアミン生合成と分泌の調節にはプロテインキナ-ゼ(PK)系とくにPKーCの関与が示唆された。
2.Ca^<2+>の代わりにBa^<2+>を用いて行った生合成、分泌機構の検索から、低濃度Ba^<2+>の作用がPKーCの阻害薬によって阻害され、またホルボ-ルエステルで長期処理し、PKーCの活性を低下させた細胞ではBa^<2+>の作用が著減することから、生合成、分泌機構におけるPKーCの役割を考察することができた。

研究成果

• [文献書誌] Manabu,Yoshikawa: "Localization and release of immunoreactive VIP in bovine adrenal medulla" Neurosci.Lett.111. 75-79 (1990)
• [文献書誌] Kyoji,Morita: "Effects of bioflavonoids on exocytotic release of catecholamine from digitoninーpermeabilized chromaffin cells" Neurochem.Int.16. 313-318 (1990)
• [文献書誌] Kyoji,Morita: "Effects of bioflavonoids on catecholamine biosynthetic activity in the adrenal gland" Neurochem.Int.17. 21-26 (1990)
• [文献書誌] Shuichi,Hamano: "Pharmacological study on Ba^<2+>ーstimulated catecholamine secretion from cultured bovine adrenal chromaffin cell" Jpn.J.Pharmacol.55. 43-50 (1991)
• [文献書誌] Atsushi,Nakanishi: "Palytoxin:A potent stimulator of catecholamine release from cultured bovine adrenal chromaffin cell" Neurosci.Lett.121. 163-165 (1991)
• [文献書誌] 岡 源郎: "副腎髄質ー神経細胞のモデルとしての副腎クロマフィン細胞" 生体の科学. 41. 125-133 (1990)