Thy-1陽性樹枝状表皮細胞におけるT細胞レセプタ-の分子生物学的・生化学的研究

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01480265
• 研究機関: 山梨医科大学
• 研究代表者: 島田 眞路 山梨医科大学, 医学部, 助教授 (10114505)
• 研究分担者: 大竹 直人 山梨医科大学, 医学部, 助手 (40194188) ; 窪田 泰夫 山梨医科大学, 医学部, 助手 (10126047)
• キーワード: Thy-1陽性樹枝状表皮細胞 / T細胞レセプタ- / T細胞レセプタ-γδ / CD_3 complex / ヌ-ドマウス / パ-フォリン

研究概要

Thy-1陽性樹枝状表皮細胞(Thy-1^+dendritic epidermal cells:以後Thy-1^+DECとする)は、マウス表皮内に存在する骨髄由来の樹状細胞であり、Thy-1^+DC4^-DC8^-の表皮マ-カ-をもつ。
平成元年度の第1の研究目的は、正常マウスにおけるThy-1^+DECのT細胞レセプタ-(TCR)の検討であったが、Thy-1^+DECをfreshな状態でenrichし、^<125>Iにより細胞表面タンパクをラベルし、抗CD3抗体、抗γ鎖抗体を用いた免疫沈降法により解析した。Thy-1^+DECはTCRγδとCD3 complexを表現していることが明らかとなった。
第2の目的はヌ-ドマウス由来細胞株のTCRの検討である。細胞株としては、7.18、8.1、8.27SD、10.31Aを樹立した。各細胞株のTCRを上記免疫沈降法にて解析を行った。7.18、8.1株はTCRαβを、8.27SD、10.31株はTCRγδを表現していた。これは、各鎖のcDNAを用いたnorthern blotting法においても確認された。又、ヌ-ドマウスのThy-1^+DECは免疫蛍光法ではCD3^-である。細胞株のFACSを用いた解析でもCD3^-であったが、免疫沈降法にてTCRとともにCD3 complexを免疫沈降できた。正常のCD3 complexは少なくともγδεζ鎖からなるが、我々の細胞株ではγ、ε鎖のみ認められた。さらにnorthern blotting法にてmRNAレベルで解析したところ、CD3ζ鎖のmRNAは認められたが、CD3δのmRNAは存在しなかった。すなわちヌ-ドマウスThy-1^+DECのCD3 complexは少なくともひとつの鎖δ鎖が欠損していることがわかった。そのsignal transductionにおける役割については現在検討中である。またTCRγδについてはどのVγ、Vδを使用しているのか現在検討中である。またこれらの細胞株はその機能として非特異的なキラ-活性をもっていた。キラ-T細胞に特徴的なserine esteraseやパ-フォリンについて検討したところ、いずれの細胞株も、キラ-T細胞と同等のserine esterase活性、パ-フォリンを有していることが明らかとなった。

研究成果

• [文献書誌] 島田眞路: "Thy-1陽性樹枝状表皮細胞におけるT細胞レセプタ-の分子生物学的・生化学的研究" 日本リディアオリリ-協会63年度年報. 12巻. 65-68 (1989)
• [文献書誌] 島田眞路: "T細胞抗原認識におけるMHCの役割" 臨床免疫. 21巻. 1352-1361 (1989)
• [文献書誌] 島田眞路: "Thy-1陽性樹枝状表皮細胞とT細胞レセプタ-γδ--update" Medical Immunology.
• [文献書誌] Shinji Shimada etal: "Freshly Tsolated Thy-1^+dendritic epidermal Cells express T cell receptor γδ."
• [文献書誌] Shinji Shimada etal: "Biochemical and Functional characterization of Thy-1^+ dendritic epidermal Cells Cultured from the epidermis of congenitally athymic nude mice."
• [文献書誌] Kobata T.Shimada S.etal: "Thy-1 positive dendritic epidermal Cell clones contain a kilier protein perforin."
• [文献書誌] 島田眞路: "現代皮膚科学大系Thy-1陽性樹枝状表皮細胞" 中山書店, 6ペ-ジ (1989)
• [文献書誌] 島田眞路: "アレルギ-性皮膚疾患-Thy-1陽性樹枝状表皮細胞" 協和企画, 8ペ-ジ (1989)