プロテア-ゼを用いた血液アイソザイムの分画

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01480506
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 岡部 紘明 熊本大学, 医学部, 教授 (20185466)
• 研究分担者: 岡嶋 研二 熊本大学, 医学部, 助手 (60152295) ; 宇治 義則 熊本大学, 医学部, 助手 (90203512)
• キーワード: protease 401 / selective proteolysis / mitochondrial aspartate aminotransferase / proteolytic isoenzyme assay / aspartate aminotransferase / cytosolic aspartate aminotransferase / lactate dehydrogenaseー1 / apoーmitochondrial aspartate aminotransferase

研究概要

血液中に逸脱する酵素であるアスパルテ-トアミノトランスフェラ-ゼについて、酵素の臓器からの精製、各種プロテア-ゼの反応性について検討し、プロテア-ゼ401,およびプロティナ-ゼKがヒトサイトゾ-ル由来アスパルテ-トアミノトランスフェラ-ゼを阻害し,ヒトミトコンドリア由来アスパルテ-トアミノトランスフェラ-ゼを阻害しないことを確認した。これらのプロテア-ゼをアスパルテ-トアミノトランスフェラ-ゼの測定系に導入した場合の至適条件の検討を行い、安定した精密度、正確度の高いアスパルテ-トアミノトランスフェラ-ゼアイソエンザイムの測定系を確立した。
本法は迅速かつ簡便であり自動分析装置での測定が可能であり、動物由来の酵素についても同様の反応性が確認され動物血清のアスパルテ-トアミノトランスフェラ-ゼの測定も可能である。
また、同様に血液中に逸脱するラクテ-トデハイドロゲナ-ゼについてもグアニジンとαーキモトリプシンの併用により、ラクテ-トデハイドロゲナ-ゼー1のみを測定できる系を確立した。
このことは心筋梗塞患者等における迅速検査として有用なものと考えられる。

研究成果

• [文献書誌] Okabe H,Sugiuchi H,Yamane N,Watanabe N,Inoue M,Morino Y,Hayasaki K,Teranishi H,and Inayama S.: "Mitochondrial aspartate aminotransferase by immunoprecipitation method in patients with acute myocardial infarction." Clin Physiol Biochem. 7. 109-118 (1989)
• [文献書誌] 岡部 紘明: "プロテア-ゼを用いたアイソザイムの分画法(LD_1の測定)" 医学のあゆみ. 150. 148 (1989)
• [文献書誌] 岡部 紘明: "プロテア-ゼを用いたmーGOT(AST)の測定法" 臨床検査. 33. 325-327 (1989)
• [文献書誌] Watazu Y,Uji Y,Sugiuchi H,Okabe H,and Murao S.: "New automated measurement of mitochondrial aspartate aminotransferase with use of protease 401" Clin Chem. 36. 687-689 (1990)
• [文献書誌] Okajima K,Inoue M,Koga S,Okabe H,and Takatsuki K.: "Plasma polymorphonuclear leukocyte elastaseーα_1ーproteinas^^｀e inhibitor complex in patients with gastric ulcer." Clin Chim Acta. 189. 237-242 (1990)
• [文献書誌] Watazu Y,Okabe H,Sugiuchi H,Uji Y,Shirahase Y,and Kaneda N.: "Proteolytic measurement of mitochondrial aspartate aminotransferase in human serum." Clin Biochem. 23. 127-130 (1990)
• [文献書誌] Okabe H,Uji Y,Sugiuchi H,Watazu Y,Shirahase Y,and Kaneda N.: "Optimal concentrations for protease use in the assay of serum mitochondrial asparate aminotransferase." Clin Lab Anal. 4. 350-354 (1990)
• [文献書誌] Yamamoto T,Shibuya Y,Nishino N,Okabe H,and Kanbara T.: "Activation of human Hageman factor by pseudomonas aeruginosa elastase in the presence or absence of negatively charged substance." Biochem et Biophys Acta. 1038. 231-239 (1990)
• [文献書誌] 岡部 紘明: "プロテア-ゼを用いたアイソザイムの分画法" Medical Technology. 18. 186-188 (1990)
• [文献書誌] 渡津 吉史,白波瀬 泰史,兼田 喜明,宇治 義則,岡部 紘明,杉村 博幸: "プロテア-ゼ401を用いた新しいミトコンドリア由来アスパラギン酸アミノトランスフェラ-ゼの活性測定法" 臨床検査. 34. 849-853 (1990)
• [文献書誌] 渡津 吉史,宇治 義則,岡部 紘明,白波瀬 泰史,兼田 喜明: "Proteinase Kを用いた新しいmーASTの測定法" 生体試料分析. 13. 123-128 (1990)
• [文献書誌] Shirahase Y,Watazu Y,Kaneda K,Uji Y,OKabe H,and Arthur Karmen: "Specific assay of serum lactate dehydrogenaseー1 isozyme using proteolysis with αーchymotrypsin and protein denaturation." Clin Chem.