蛋白工学的に改変したインヒビタ-によるプロテア-ゼ・基質相互作用の結晶学的研究

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01480516
• 研究機関: 長岡技術科学大学
• 研究代表者: 三井 幸雄 長岡技術科学大学, 工学部, 教授 (40012637)
• キーワード: プロテア-ゼ / プロテア-ゼ・インヒビタ- / 蛋白・蛋白相互作用 / 蛋白工学 / 蛋白質工学 / X線解析 / 結晶構造 / 蛋白質の立体構造

研究概要

前年度に調製した変異SSI(Met73Lys,Met70Gly)は、ウシのTrypsinとも複合体を作ることがわかった。そこで、この両者の複合体を作って結晶化した。このもののX線回折強度を、シンクロトロン放射光を使って測定し、分子置換法による解析を行った。その結果は、P1部位のLysの側鎖の正の電荷がTrypsinのS1ポケットのAsp189の負の電荷と直接水素結合を作っていることを示した。このように、ある一つの蛋白性インヒビタ-とプロテア-ゼとの複合体の構造が、2種類の全く異なる酵素、(SubtilisinとTrypsin)について解明されたことは、世界でも初めてのことであり、画期的的なことである。今後、更に両複合体の構造の詳細な比較を行いたいと考えている。

研究成果

• [文献書誌] Y.Takeuchi,S.Kojima,K.Miura,Y.Mitsui: "Molecular Recognition at the Interface between Subtilisin and SSI" Protein Engineering (M.Ikehara ed.)Japan Scientific Societies Press. 103-108 (1990)
• [文献書誌] Y.Takeuchi,S.Kojima,K.Miura,Y.Mitsui: "Molecular Recognition at the Active Site of Subtilisin BPN'" Protein Engineering. (1991)
• [文献書誌] Y.Takeuchi,K.T.Nakamura,Y.Mitsui: "Refined Crystal structure of the Complex of Subtilisim and SSI" J.Mol.Biol.(1991)
• [文献書誌] 三井 幸雄,石川 弘紀,竹内 康雄: "タンパク質の立体構造と機能" 現代化学,増刊19「プロティン、エンジニアリング」. 145-160 (1990)
• [文献書誌] 熊谷 泉,竹内 康雄,三井 幸雄,三浦 謹一郎: "プロテア-ゼとプロテア-ゼ・インヒビタ-" シリ-ズ分子生物学の進歩 3.蛋白質の機能構造. 219-241 (1990)