分泌果粒膜蛋白の合成、細胞内輸送の検索

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01570018
• 研究機関: 慶応義塾大学
• 研究代表者: 山下 修二 慶應義塾大学, 医学部・解剖, 講師 (90050666)
• 研究分担者: 塩沢 昌英 慶應義塾大学, 医学部・解剖, 助手 (50170840) ; 安田 健次郎 慶應義塾大学, 医学部・解剖, 教授 (90050327)
• キーワード: 分泌果粒共通抗原 / モノクロナ-ル抗体 / 免疫電顕

研究概要

ウサギ耳下腺の分泌果粒膜蛋白に対するモノクロナ-ル抗体を作製しウサギの外分泌腺、内分泌腺細胞の分泌果粒に共通抗原が存在することはすでに報告した。今年度は、この共通抗原の物理、化学的性質の解析および免疫電顕法による局在の証明を主として行った。更に、ラット耳下腺の分泌果粒膜蛋白に対するモノクロナ-ル抗体を新たに作製し、ラットにおいても分泌果粒膜に共通抗原が存在するか否かを検索した。
ウサギ:免疫電顕法により、耳下腺、膵臓外分泌腺細胞、下垂体前葉細胞において、共通抗原は主として分泌果粒膜に局在し、さらにライソゾ-ム、ゴルジ装置、外分泌腺細胞の管腔側の細胞膜にも弱い反応が認められた。この共通抗原は、分子量55-60KdのN^-結合型糖鎖を有する膜結合蛋白であることが判明した。更にこの共通抗原は分泌果粒の内腔側に局在することが明らかになった。酵素処理により糖鎖を切断した蛋白の分子量は42Kdであった。これらの結果は、Acta histochem cytochem.(1989)に発表した。
ラット:作製したモノクロナ-ル抗体を用いた免疫組織化学的検索により、ラットにもウサギと同様に分泌果粒膜共通抗原が存在することが証明された。共通抗原はN^-結合型糖鎖をもつ糖蛋白質であり、分子量は約60-90Kdで、膜に結合していることが判明した。免疫電顕により、耳下腺、膵外分泌腺細胞の分泌果粒膜、ライソゾ-ム、管腔側の細胞膜に局在することが明らかになった。モノクロナ-ル抗体を用いたアフィニティ-クロマトグラフィ-により、ラット耳下腺より本共通抗原を精製し、現在一次構造の解析を行っている。

研究成果

• [文献書誌] Shuji Yamashita,Sadakazu Aiso and Kenjiro Yasuda: "Monoclonal antibodies to the secretory granule membrane of the rabbit parotid gland:Presence of a common antigen in secretory granules of both exocrine and endocrine cells." Acta histochem.cytochem.22. 517-534 (1989)
• [文献書誌] Shuji Yamashita,Sadakazu Aiso,Masahide Shiozawa and Kenjiro Yasuda: "Immunohistochemical study of gamma-glutamyl transpeptidase with monoclonal antibodies.II an immunoelectron microscopic study in rat kidney." Acta histochem.cytochem.22. 374-367 (1989)
• [文献書誌] Shuji Yamashita and Kenneth S.Korach: "Immunological analysis of the biological properties of the uterine estrogen receptor." Biol.Rep.40. 1275-1285 (1989)
• [文献書誌] Masahide Shiozawa,Shuji Yamashita,Sadakazu Aiso and kenjiro Yasuda: "A monoclonal antibody against human kidney gamma-glutamyl transpeptidase:Preparation,immunochemical and immunohistochemical characterization." J.Histochem.Cytochem.37. 1053-1061 (1989)
• [文献書誌] Kenjiro Yasuda,Shuji Yamashita and Masahide Shiozawa: "An experimental study on the application of microwave fixation to immunohistochemical study." Acta histochem.cytochem.22. 91-103 (1989)
• [文献書誌] Kenjiro Yasuda,Masahide Shiozawa,Sadakazu Aiso,Shozo Taniguchi,S.Yamashita: "Disribution of gamma-glutamyl transpeptidase in human pancreas:Immunohistochemical study with monoclonal antibody." J.Histochem.Cytochem.38. 339-350 (1990)
• [文献書誌] 安田健次郎,平岡芳樹,山下修二: "組織細胞化学1989(分担執筆)" 学際企画, 206、 (18-31) (1989)