1989 年度実績報告書

毒素原性大腸菌変異株によるLTのAサブユニット構造と機能の解析

研究課題

研究課題/領域番号	01570235
研究機関	藤田保健衛生大学
研究代表者	辻孝雄藤田学園保健衛生大学, 医学部, 講師 (60171998)
キーワード	毒素原性大腸菌 / コレラ菌 / 易熱性エンラロトキシン / コレラ毒素 / A,Bサブユニット / アデニレ-トサイクラ-ゼ / 突然変異株
研究概要	全世界で今尚毎年下痢症によって500万人の人々が死亡している。毒素原性大腸菌およびコレラ菌はその中心的原因菌である。両菌による下痢症の原因物質として易熱性エンテロトキシン(LT)、コレラ毒素(CT)があげられ、下痢がどのようにして発症するかその機構の解明が急がれている。両毒素はA、Bサブユニット(A、B)より構成されAは毒素本来の活性を示し、Bは毒素を標的細胞に結合させる役割をしている。AはA_1、A_2フラグメント(A_1、A_2)に区けられ、A_1が細胞膜中のアデニレ-トサイクラ-ゼを活性化し、細胞内cAMPを上昇させる。そこで我々はA_1のどの部位がアデニレ-トサイクラ-ゼの活性化に関与するかを明らかにする目的で本研究を企画した。まず両毒素の毒素活性中心であるA_1の突然変異株の分離を試みた。その結果、毒素活性(ウサギ腸官結〓試験、ウサギ毛細血管方進試験等)が正常のLTに比べ1/10000以下に低下した変異LT産生株の分離に成功した。この変異LTはA、Bより構成され、Bの生物活性(1.GM_1qangliesideとの結合能、2.Aとの結合能、3.BのColigenoid形成能)に変化はなかった。またハイブリッドトキシンの結果からAに異常があることが明らかにされた。さらにこの変異LTのAのトリプシンに対し正常のAと全く同じ部位にニックが入り、ニックLTも生物活性は認められなかった。しかもアミノ酸組成の解析から変異LTのA_2、及びBは正常の各々と全く同じ組成を示した。以上のことから変異LTはA_1の異常により生物活性が欠除していることが明らかになり、現在クロ-ニングDNAの塩基配列の決定を行っている。

研究成果

(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Takao Tsuji et al: "Crystallization and preliminary X-ray diffraction study of the heat-labile enterotoxin B subunit" Jounal of Molecuiar Biology. 208. 207-208 (1989)
[文献書誌] Shunji Sugii and Takao Tsuji: "Studies on the binding substances on human erythrocytes for the heat-labile enterotoxin isolated from chicken enterotoxigenic Escherichia coli" Biochem Biophysica.Acta.983. 30-34 (1989)
[文献書誌] Tetsuya Iida ea al: "A single amino acid substitution in B subunit of Escherichi coli enterotoxin affects its oligomer formation" Journal of Biological Chemistry. 264. 14065-14070 (1989)
[文献書誌] Takao Tsuji et al: "Charge heterogeneity of heat-labile enterotoxins from human enterotoxigenie Escherichia coli" FEMS.Microbiology.Letter.61. 1-6 (1989)
[文献書誌] Takao Tsuji et al: "A heat-labile enterotoxin(LT)purified from chicken enterotoxigenic Escherichia coli is identical to porcine LT" FEMS,Microbiology.Letter.(1990)
[文献書誌] Shunji Sugii and Takao Tsuji: "Binding and hemagglutinating properties of the B subunit(s)of heat-labile enterotoxin isoalted from human enterotoxigenic Escherichia coli" FEMS,Microbiology.Letter.(1990)

1989 年度 実績報告書

毒素原性大腸菌変異株によるLTのAサブユニット構造と機能の解析

研究代表者

辻 孝雄 藤田学園保健衛生大学, 医学部, 講師 (60171998)

研究成果

[文献書誌] Takao Tsuji et al: "Crystallization and preliminary X-ray diffraction study of the heat-labile enterotoxin B subunit" Jounal of Molecuiar Biology. 208. 207-208 (1989)

[文献書誌] Shunji Sugii and Takao Tsuji: "Studies on the binding substances on human erythrocytes for the heat-labile enterotoxin isolated from chicken enterotoxigenic Escherichia coli" Biochem Biophysica.Acta.983. 30-34 (1989)

[文献書誌] Tetsuya Iida ea al: "A single amino acid substitution in B subunit of Escherichi coli enterotoxin affects its oligomer formation" Journal of Biological Chemistry. 264. 14065-14070 (1989)

[文献書誌] Takao Tsuji et al: "Charge heterogeneity of heat-labile enterotoxins from human enterotoxigenie Escherichia coli" FEMS.Microbiology.Letter.61. 1-6 (1989)

[文献書誌] Takao Tsuji et al: "A heat-labile enterotoxin(LT)purified from chicken enterotoxigenic Escherichia coli is identical to porcine LT" FEMS,Microbiology.Letter.(1990)

[文献書誌] Shunji Sugii and Takao Tsuji: "Binding and hemagglutinating properties of the B subunit(s)of heat-labile enterotoxin isoalted from human enterotoxigenic Escherichia coli" FEMS,Microbiology.Letter.(1990)

1989 年度実績報告書

辻孝雄藤田学園保健衛生大学, 医学部, 講師 (60171998)