B細胞における遺伝的拘束性を決定する要因の分子生物学的解析

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01570271
• 研究機関: 高知医科大学
• 研究代表者: 山元 弘 高知医科大学, 医学部, 助教授 (50127312)
• 研究分担者: 藤本 重義 高知医科大学, 医学部, 教授 (00009151) ; 谷口 武利 高知医科大学, 医学部, 助教授 (90127944)
• キーワード: イディオタイプネットワ-ク / マウスB細胞 / B細胞クロン / 免疫グロブリン遺伝子 / B-B細胞間相互作用

研究概要

イディオタイプ特異的に、抗体産生を増強するB細胞群を同定した。この活性を有するB細胞のクロン化を試み、B細胞クロンB19-1^d及びそのハイブリド-マ細胞HB19の樹立に成功した。B-B細胞間相互作用は、免疫グロブリン重鎖遺伝子群、及び主要組織適合性抗原による遺伝子的拘束性が存在することが証明できた。そこで、B細胞クロン由来ハイブリド-マHB19、及び標的イディオタイプの典型としてのHOPC104Eミエロ-マ細胞からcDNAライブラリ-を作成し、V-D-J領域の遺伝子クロ-ニングを行ない、それぞれの塩基配列を決定した。その結果、両者は極めて類似した塩基配列を示し、その相同性は89%であった。このことは、両者が同じV_H遺伝子サブファミリ-に属する近縁関係にあることが予想される。次いで、両V_H遺伝子のGerm Line DNA上の相対的位置関係を推定する目的で、両者のgenomic DNAをクロ-ニングした。HB19及び、MOPC104EよりDNAを得、J_Hをプロ-ブとしてrearranged DNA E_<CO>KI断片をλgt10ファ-ジにクロ-ニングし、次いでpuC19にサブクロ-ニングした。次いで、それぞれに特異的なDNAプロ-ブを 遺伝子5'側上流に求めた。E_<CO>RI genomic DNA断片上最も5'側の部分をpuC19にサブクロ-ニングし、得た断片をプロ-ブとして、マウス肝高分子DNAとサザンハイブリダイゼ-ションを行なった。その結果、high stringency conditionにおいて、それぞれの5'側プロ-ブに反応するDNA断片が検出された。この結果は、5'側プロ-ブがV_H遺伝子の特異的プロブになり得ることを示唆する。一方、このプロ-ブを用い、肝DNAライブラリ-、charon 28 LIO16をスクリ-ニングしたところ、両者にハイブリダイズするクロ-ンが1つだけ見つかった。現在、その遺伝子構造の解析を行なっている。

研究成果

• [文献書誌] Bitoh,S;Fujimoto,S;Yamamoto,H: "Idiotypic and anti-idiotypic B-B cell interaction is controlled by major histocompatibility complex-restricted regulation." Immunology. 66. 479-484 (1989)
• [文献書誌] Taniguchi,T et al: "Isolation of a cDNA clone encoding bovine poly(ADP-ribose) synthetase by immunological screening of a cDNA expression library and its application as a probe." ADP-ribose Transfer Reactions:Mechnism and Biological Significance. 515-519 (1989)
• [文献書誌] Maeda,N et al: "Augmentation of human cytotoxic T lymphocytes against autologous tumor by a factor released from human monocytic leukemia cell line." Japanese Journal of Cancer Research. 80. 537-545 (1989)
• [文献書誌] Bitoh,S;Fujimoto,S;Yamamoto,H: "Evidence for idiotypic and anti-idiotypic B-B cellular interaction with the use of cloned anti-idiotypic B cell line." Journal of Immunology. 144. (1990)
• [文献書誌] Taniguchi,T et al: "Requirement of down-regulation of NAD^+ ADP-ribosyl-transferase for the interferon-γ-induced activation precess of murine macrophage tumor cells." European Journal of Biochemistry.
• [文献書誌] Tomoda,T et al: "Depression in gene expression for poly(ADP-ribose)synthetase during the hemin-inducederythroid differentiation of human leukemia K562 cells." European Journal of Biochemistry.