家族性異常グルココルチコイド受容体の分子遺伝学的解析

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01570638
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 飯田 さよみ 大阪大学, 医学部, 助手 (40159554)
• 研究分担者: 森脇 要 大阪大学, 医学部, 助教授 (90028548)
• キーワード: コルチゾ-ル抵抗症 / グルココルチコイド受容体 / コルチゾ-ル / デキサメサゾン / グルココルチコイド受容体遺伝子

研究概要

家族性コ-チゾ-ル低抗症症例細胞を用いてグルココルチコイド受容体の分子遺伝子学的解析をおこなった。グルココルチコイド結合測定では受容体数が半分に減少している。Dexamethasone mesylateでラベルした本症例のグルココルチコイド受容体は正常と同じ分子量をもつことが明らかとなった。グルココルチコイド受容体のC端を認識する抗体をつかってWestern blot解析を行った結果、受容体蛋白量は半減しており、受容体の分子量は正常であった。Northern blot解析では患者細胞のグルココルチコイド受容体mRNAのサイズは正常であり、発現量も正常であった。これらの結果から本症例においては、グルココルチコイド受容体遺伝子の転写には異常がなく、正常の受容体蛋白が合成されないような変異遺伝子が存在する可能性が示唆された。そこで本症例細胞のグルココルチコイド受容体遺伝子の塩基配列の決定を試みた。細胞より総RNAを抽出後、リバ-ストランスフェラ-ゼによりcDNAを作成した。このグルココルチコイド受容体cDNAをPCRにより増幅し、直接法によるシ-クエンス決定を行った。現在のところ異常受容体遺伝子の決定には至っていない。これまでにサブクロ-ニングによるシ-クエンス決定を何回か施行したが、本症例ではヘテロ接合と予想されるように、異常受容体cDNAのサブクロ-ニングのチャンスがなかった。これからの方向としてはPCRから直接法によるシ-クエンス決定という手段で、本症例細胞の異常グルココルチコイド受容体遺伝子の同定をしたいと思う。

研究成果

• [文献書誌] 飯田 さよみ,五味 正裕,藤井 宏,津川 真美子,森脇 要,垂井 清一郎: "コルチゾ-ル抵抗症のー家系ーEpsteinーBarr Virus(EBV)ーtransformed lymphocytesのグルココルチコイド受容体(GR)解析" 日本臨床代謝学会記録(XXVI). 316-317 (1989)
• [文献書誌] SAYOMI IIDA,MASAHIRO GOMI,HIROSHI FUJII,MAMIKO TSUGAWA,KANAME MORIWAKI,SEIICHIRO TARUI: "Properties of glucocorticoid receptors in EpsteinーBarr virusーtransformed lymphocytes from patients with faimilial cortisol resistance." Cancer Research. 49(8). 2214s-2216s (1989)
• [文献書誌] SAYOMI IIDA,YOSHIHISA NAKAMURA,HIROSHI FUJI,JUNーICHI NISHIMURA MAMIKO TSUGAWA,MASAHIRO GOMI,JUNICHI FUKATA,SEIICHIRO TARUI,KANAME MORIWAKI,TERUO KITANI: "A Patient with hypercortisolism and Cushing's syndromeーlike manifestations:Cortisol hyperreactive syndrome." Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 70(3). 729-737 (1990)
• [文献書誌] SAYOMI IIDA,KANAME MORIWAKI,HIROSHI FUJII,MASAHIRO GOMI,MAMIKO TSUGAWA,YOSHIHISA NAKAMURA,TERUO KITANI,SEIICHIRO TARUI: "Quantitative comparison of aromatase induction by dexamethasone in fibroblasts from a patient with familial cortisol resistance and a patient with cortisol hyperreactive Syndrome" Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. (1991)