| 研究課題/領域番号 |
01571020
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
福井 公明 徳島大学, 歯学部, 教授 (40035407)
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| 研究分担者 |
根本 謙 徳島大学, 歯学部, 助手 (10218274)
長宗 秀明 徳島大学, 歯学部, 助手 (40189163)
太田 房雄 徳島大学, 歯学部, 助教授 (90035478)
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| キーワード | う蝕 / S'treptococcus mutans / 菌種特異的蛋白質抗原 / 単クロ-ン抗体 |
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| 研究概要 |
ヒトに対して強いう蝕原性を有するミュ-タンス群連鎖球菌の一種であるストレプトコッカス・ミュ-タンスの菌種に特異的な菌体表層蛋白質抗原のクロ-ニングを行う際に、遺伝子発現系での抗原検出用プロ-ブとして使用する単クロ-ン抗体を得るため、本菌種の血清型fであるSE17株を用いてマウスを免疫し得られた免疫脾細胞をミエロ-マ細胞と常法により融合させてハイブリド-マを作製した。得られたハイブリド-マの内、5クロ-ンはミュ-タンス群連鎖球菌中でストレプトコッカス・ミュ-タンスに特異的に反応する単クロ-ン抗体を分泌していた。その内の1クロ-ンの分泌する抗体は本菌種の細胞壁多糖抗原やリポイタコ酸分画とは全く反応せず、また他の口腔連鎖球菌のストレプトコッカス・ミチス(4株)、ストレプトコッカス・サングイス(4株)、ストレプトコッカス・サリバリウス(2株)、ストレプトコッカス・ミレリ(1株)とも交差性を示さなかった。さらにこの抗体は多くの口腔連鎖球菌に共通して存在する表層蛋白質抗原AgI/IIとも反応性を示さないことから、本抗体はストレプトコッカス・ミュ-タンス特異的な未知の蛋白質抗原を認識している可能性が高い。しかし、本抗体の認識する抗原を含むストレプトコッカス・ミュ-タンス培養上清の硫安沈澱分画をSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動後、本抗体を用いてイムノブロット法により当該抗原の検出を試みたが明瞭な蛋白質バンドを検出することはできなかった。これは電気泳動中に抗原が変性しその抗原決定基構造が失われることに起因する可能性が考えられるため、より緩和な分析手段を用いて、現在その抗原を鋭意解析中である。次に、遺伝子スクリ-ニング用のストレプトコッカス・ミュ-タンス遺伝子ライブラリ-は、本菌種のIngbritt株よりDNAを抽出し、大腸菌系発現ベクタ-のλgt11に組み込んで構築中である。
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