胎児性胆汁酸を指標とする先天性肝胆道疾患診断法の開発

1991 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01571182
• 研究機関: 東日本学園大学
• 研究代表者: 池川 繁男 東日本学園大学, 薬学部, 助教授 (90111301)
• 研究分担者: 吉村 昭毅 東日本学園大学, 薬学部, 助手 (60220737) ; 馬原 礼二郎 東日本学園大学, 薬学部, 助手 (30192347) ; 藤間 貞彦 東日本学園大学, 薬学部, 教授 (30001043)
• キーワード: 先天性肝胆道疾患 / 胎児性胆汁酸 / イムノアッセイ / Tauro 1βーhydroxycholic acid

研究概要

前年度までに開発したtaurol βーhydroxycholic acid(Tauro CAー1 βーol)のラジオイムノアッセイ(RIA)を先天性胆道閉鎖症(CBA)のマススクリ-ニング法として活用すべく、血液浸染乾燥ろ紙(DBS)中本胆汁酸の微量定量法を開発し患児に適用するとともに、ガスクロマトグラフィ-ー質量分析計(GCーMS)によるプロファイルアナリシスによって裏付けとなる胆汁酸組成の解析を試みた。
【RIAによる先天性胆道閉鎖症のマススクリ-ニング法の開発】
生後5日の新生児足踵より得られるDBS1disc(1/8inch:全血4μl)を緩衝液(0.1ml)中1時間超音波処理後、直後RIAに付し胆汁酸濃度を求めた。本法の添加回収率は86〜109%であり、変動係数は3.4〜8.8%と信頼度の高いアッセイ法であった。健常新生児のDBS193検体を測定したところ、0.97±0.68ng/discであり、GCーMSで測定した結果とよく符合するものであった。これに対してCBA5検体では2.35±0.5ng/discと優位に高い値を示し、診断法としての可能性が示唆された。
【GCーMSによるプロファイルアナリシス】
胆汁酸を電子親和性の高い含フッソ誘導体とし、化学イオン化負イオン検出GCーMS法による定量法の開発を試みたところ、従来のEI法と比較して約200倍感度が向上し、検出限界1fg(S/N=5)の超微量定量が可能となった。本法をDBS1disc中胆汁酸組成の微量分析に適用したところRIA法の測定結果を支持する結果が得られRIA法によるマススクリ-ニングの基盤を確立することが出来た。今後、さらに迅速簡便なELIA法の確立を計るとともに、臨床への応用を展開する予定である。

研究成果

• [文献書誌] Shigeo Ikegawa: "Quantitative Determination of Conjugated Fetal Bile Acids in Urine by Chemiluminescence HighーPerformance Liquid Chromatography" Journal of PharmacobioーDynamics. 14. S-92 (1991)
• [文献書誌] Yoshinobu Hata: "Fetal bile acids in congenital biliary atresiaーproduction in the liver and clinical significance" Pediatric Surgery International. 6. 309-312 (1991)
• [文献書誌] Shigeo Ikegawa: "Measurement of Conjugated 1βーHydroxycholic Acid in Urine of Newborns by Specific Radioimmunoassay" Chemical & Pharmaceutical Bulletin. 40. 701-704 (1992)
• [文献書誌] Shigeo Ikegawa: "Conjugated 1βーHydroxycholic Acid in the Urine of Newborns and Pregnant Women measured by Radioimmunoassay using Antisera raised against Nー(1βーHydroxycholyl)ー2ーaminopropionic AcidーBSA Conjugate" Chemical & Pharmaceutical Bulletin. (1992)
• [文献書誌] Shigeo Ikegawa: "Determination of conjugated bile acids in human urine by highーperformance liquid chromatography chemiluminescence detection" Journal of Chromatography Biomedical Applications. (1992)
• [文献書誌] Reijirア Mahara: "Determination of Fetal Bile Acids in Human Neonates by Gas ChromatographyーNegative Ion Chemical Ionization Mass Spectrometry" Analytical Sciences. 7. 983-986 (1992)
• [文献書誌] 著者多数(分担執筆): "生物薬科学実験講座" 廣川書店, (1992)