化学発光反応を用いる脱水素酵素システムの開発とその応用

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01571185
• 研究機関: 昭和大学
• 研究代表者: 前田 昌子 昭和大学, 薬学部, 助教授 (00053869)
• 研究分担者: 荒川 秀俊 昭和大学, 薬学部, 専任講師 (70129807) ; 辻 章夫 昭和大学, 薬学部, 教授 (80053784)
• キーワード: 化学発光 / NAD(P)H / 脱水素酵素 / ルミノ-ル / 酵素リアクタ- / イソルミノ-ル / HPLC / 胆汁酸

研究概要

NAD(P)Hが電子伝達体の1ーメトキシフェナジンメチルサルフェ-ト(1ーMPMS)により溶存酸素をH_2O_2に変換し、これがマイクロペルオキシダ-ゼ(mーPOD)の触媒作用によりイソルミノ-ルで化学発光する上記反応の応用として当該年度は以下の検討を行なった。
1)3αーステロイドデヒドロゲナ-ゼをガラスビ-ズに固定化したリアクタ-を検出部に用いる胆汁酸の化学発光高速液体クロマトグラフィ-を確立し、国際クロマトグラフィ-会議にて報告し、J.Chromatographyに投稿した。
2)3αーステロイドデヒドロゲナ-ゼ、グルコ-ス脱水素酵素、ヘキソキナ-ゼ/グルコ-スー6ーリン酸脱水素酵素をガラスビ-ズに固定化し、血液中の胆汁酸、グルコ-ス、ATPのフロ-インジェクション分析法を確立し、J.Flow Injection Analysisに投稿。
3)新たにアルカリホスファタ-ゼの酵素活性の測定に本化学発光法を応用した。 アルカリホスファタ-ゼの酸素サイクリング法も検討し日本薬学会(1990年8月)にて報告した。

研究成果

• [文献書誌] Masako MAEDA: "High Performance Liquid Chromatogrphy with 3 ーHydroxysteroid Dehydrogenase Post Column Reactor and Isoluminolーmicroperoxidase Chemiluminscence Detection" J.Chromatography. 515. 329-335 (1990)
• [文献書誌] Motoko TAKEDA: "Chemiluminescence High Performance Liquid Chromatography of Corticostroide Using Lucigenin as Postーcolum Reagent" Biomedical Chromatogrphy. 4. 119-122 (1990)
• [文献書誌] Hidetoshi ARAKAWA: "Fluorescent Enzyme Immunoassay of Free Thyroxin Using Glucose Oxidase as Enzyme Label" Analytical Sciences,. 6. 33-37 (1990)
• [文献書誌] Akio,TSUJI: "Chemiluminescent Assay of Enzymes and Its Application to Flow Injection Analysis" J.Flow Injection Analysis. 7. 87-100 (1990)
• [文献書誌] Shingo SHIMADA: "A Sensitive Enzymatic Colorimetric Assay for Total Bile Acids Using Microtiter Plate" J.Analytical BioーScience. 13. 70-75 (1990)
• [文献書誌] Masako MAEDA: "Chemiluminescent Assay of Alkaline Phosphatase using Ascorbic Acid 2ーphosphate as substrate and Its Application to CLーEIA" J.Bioluminescence & Chemiluminescence.
• [文献書誌] Masako MAEDA: "Luminescence Immunoassay and Molecular Application (Ed.by K.Van Dyke)" CRC Press Inc., 341 (1990)
• [文献書誌] Masako MAEDA: "Advances in Clinical Chemistry" Academic Press INC., 248 (1990)