|
ラット肝の種々の細胞下画分にホスファチジン酸やホスファチジルコリンから生成してくるジアシルグリセロ-ル(DG)を速やかに水解するリパ-ゼ活性(DGリパ-ゼ活生)が存在することを見出し、このうち細胞質画分およびミクロソ-ム画分のDGリパ-ゼの性質について検討した。さらに、細胞質画分のDGリパ-ゼについてDEAEーセルロ-ス、ヘパリンセファロ-ス、ConAーセファロ-スの各カラムクロマトグラフィ-を順次行うことにより、高度に精製することに成功した。最終標品はSDSーPAGEで分子量約3万1千の位置に主要バンドを示し、純度は90%以上であると推定されたが、このほかにもきわめて薄い数本のバンドが認められた。また、部分精製標品の性質を検討したところ、次のような結果が得られた。(1)至適pHは約9.5(2)Zn^<2+>イオンにより強く阻害される(3)フッ化カリウムやセリンエステラ-ゼの阻害剤であるDIFやPMSFの添加で活性が著しい低下する(4)トリトンXー100、デオキシコ-ル酸ナトリウムなどのデイタ-ジェントおよび血清の添加で活性が促進される(5)最終標品の活性は非常に不安定であるが、ウシ血清アルブミンの添加で安定化する。
一方、SDSーPAGEのゲルより電気泳動的に31Kバンド(DGリパ-ゼ)を溶出し、これを抗原としてウサギで抗DGリパ-ゼ抗体を調製した。現在、この抗体を用いて免疫学的手法によるDGリパ-ゼの性質、生体内分布、生理的役割等の検討を行っている。
|
