自己免疫疾患マウスMRL/lprのIgGにおける糖鎖構造変化とその生理的意義

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01580174
• 研究機関: 藤田保健衛生大学
• 研究代表者: 水落 次男 藤田学園保健衛生大学, 医学部, 助教授 (90133149)
• 研究分担者: 浜子 二治 藤田学園衛生技術短期大学, 助手 (80180933)
• キーワード: 免疫グロブリン / 自己免疫疾患モデル / 糖鎖構造 / 慢性関節リウマチ / MRLマウス

研究概要

リウマチ因子(抗IgG抗体、RF)を産生するMRL/Iprマウスと対照のRFを産生しないMRL/nマウスの6ヶ月齢の血清を集めプロテインA-セファロ-スCL-4Bカラムにかけたところ、MRL/nマウスのIgG(Mn)はカラムに吸着し酸性緩衝液にて溶出したが、MRL/lprマウスのIgGはカラムに吸着せず遅れて溶出してくる画分(M1-I)とカラムに吸着し酸性緩衝液で溶出してくる画分(MIーII)に分画された。そこで、これら3種のIgG画分及びM1-IとM1-IIの混合物画分(M1)をそれぞれセファクリルS-300カラムにかけてさらに精製した。得られたIgG標品の純度はSD S-PAGE及び免疫化学的方法により高純度であることが確認された。つぎに、精製した4種のIgG標品をヒドラジン分解にかけてIgG糖鎖を定量的に遊離させた後、NaB^3H_4で還元してトリチウム標識オリゴ糖を得た。これを高圧濾紙電気泳動、Bio-Gel P-4 HPLC、RCA120-HPLC、各種グリコシダ-ゼによる逐次分解分析等にかけて糖鎖構造を調べた。その結果、どのIgG標品でも中性糖鎖が主成分であり、シアル酸を1〜2分子含む酸性糖鎖も少量存在すること、脱シアル化中性糖鎖は±Galβ1→4GlcNAcβ1→2Manα1→6(±Galβ1→4GlcNAcβ1→2Manα1→3)Manβ1→4GlcNAcβ1→4(±Fucα1→6)GlcNAcで示される8種類の構造を有していることを明らかにできた。さらに、8種の糖鎖の存在比率はMnとMl-IIでは殆ど同じであったが、M1及びMl-IではMnと比較してガラクト-スを欠いた糖鎖が顕著に増加し、RFを産生する慢性関節リウマチ患者と同様に、IgG糖鎖の主成分となっていることが明らかとなった。以上の事実は、慢性関節リウマチ患者で見いだされたIgG分子の糖鎖異常が種を超えてRF産生MRL/1prマウスにも存在しており、しかも、対照のMRL/nマウスにはないIgGサブポピュレ-ションの存在により生じていることを明白に示している。

研究成果

• [文献書誌] Tsuguo Mizuochi: "A library of oligosaccharide probes(neoglycolipids)from N-glycosylated proteins reveals that conglutinin binds to certain complex-type as well as high mennose-type digosaccharidechains" J.Biol.Chem.264. 13834-13839 (1989)
• [文献書誌] Tsuguo Mizuochi: "Diversity of oligosaccharide structures on the envelope glycoprotein gp120 of HIV-1 from the lymphoblastoid cell line H9" J.Biol.Chem.(1990)
• [文献書誌] Taei Matsui: "The occurrence of mouse-type oligosaccharides in mouse-human chimeric immunoglobulin G" Biochem.Biophys.Res.Commun.164. 245-250 (1989)
• [文献書誌] R.A.Childs: "Neoglycolipids as probes of oligosaccharide recognition by recombinant and natural mannose-binding proteins of rat and man" Biochem.J.262. 131-138 (1989)
• [文献書誌] R.W.Loveless: "Bovine serum conglutinin is a lectin which binds non-reducing terminal N-acetylglucosamine,mannose and fucose residues" Biochem.J.258. 109-113 (1989)
• [文献書誌] M.Larkin: "Oligosaccharide-mediated interactions of the envelope glycoprotein gp^<120> of the human immunodeficiency virus(HIV-1)that are independent of CD4 recognition" AIDS. 3. 793-798 (1989)
• [文献書誌] Tsuguo Mizuochi: "Rheumatology-SEAPAL" Elsevier, 107-108 (1989)
• [文献書誌] Akira Kobata: "Carbohydrate Recognition in Cellular Function" John Wiley & Sons, 224-240 (1989)