家兎骨格筋小胞体のモノ(ADP-リボ-ス)化反応

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01580192
• 研究機関: 島根医科大学
• 研究代表者: 下山 誠 島根医科大学, 医学部, 教授 (30084859)
• 研究分担者: 尾原 清司 島根医科大学, 医学部, 助手 (70204279) ; 三島 宏一 島根医科大学, 医学部, 助手 (90181875)
• キーワード: モノ(ADP-リボ-ス) / NAD / 骨格筋小胞体 / SR膜 / アルギニン / 後翻訳修飾

研究概要

家兎骨格筋小胞体(SR)をトリトンX-100で処理すると、SR膜に結合しているアルギニン-特異性ADP-リボ-ス移転酵素(Arg-ADP-R移転酵素)が可溶化される。この可溶性画分をConAアガロ-ス、レッドトヨパ-ルおよびゲル濾過によって部分精製すると、分子量4.0Kとボイド付近に相当する画分に酵素活性が検出される。この場合、用いたトリトンX-100の濃度によって高分子と低分子の比率が異なることが分かった。これは恐らくは酵素標品にトリトンX-100が付着する量が異なるためと思われる。次に、SRをトリプシンで処理し、同様の方法で部分精製すると、酵素活性はゲル濾過で43Kに相当する画分に溶出される。トリプシン処理によって得られた酵素とトリトンX-100処理で得られた低分子酵素のサイズに大差がないことから,トリプシンによって得られる酵素はほぼnativeな形で得られたものと考えられる。事実、NADやpoly-L-Argに対するKm値、至適pHなどの性質は両酵素の間に差はみられない。興味あることには、SR酵素と先に我々が見い出したニワトリ肝臓核のArg-ADP-R移転酵素はSH剤に対する性質を全く異にする。すなわち前者は2-メルカプトエタノ-ルにより阻害されるのに対し、後者は活性発現に必須である。また前者はCa^<2+>-ATPaseを、後者はニワトリ肝臓核の内在性33kDaのたんぱく質をADP-リボ-ス化するなどSRと肝臓核のArg-ADP-R移転酵素は酵素学的性質に大きな差が認められる。SR酵素がトリプシンで容易に可溶化出来ることから,本酵素とSR膜の結合領域が明かに出来るものと思われる。

研究成果

• [文献書誌] M.Taniguchi: "ARGININE-SPECIFIC ADP-RIBOSYLTRANSFERASE FROM RABBIT SKELETAL MUSCLE SARCOPLASMIC RETICULUM IS SOLUBILIZED AS THE ACTIVE FROM WITH TRYPSIN:Partial Purificatiln and Characterization" BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS. 164. 128-133 (1989)
• [文献書誌] S.Obara: "DNA-REGULATED ARGININE-SPECIFIC MONO(ADP-RIBOSYL)ATION AND DE-ADP-RIBOSYLATION OF ENDOGENOUS ACCEPTOR PROTEINS IN HUMAN NEUTROPHILS" BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS. 163. 452-457 (1989)
• [文献書誌] M.Shimoyama: "DNA-REGULATED MONO(ADP-RIBOSYL)ATION AND DE-ADP-RIBOSYLATION OF ENDOGENOUS ACCEPTOR PROTEINS IN POLYMORPHONUCLEAR LEUKOCYTES." The Biology and Medicene of Signal Transduction(7th.International Conference on Cyclic Nucleotides,Calcium,and Protein Phosphorylation. 73 (1989)
• [文献書誌] K.Mishima: "DNA-DEPENDENT MONO(ADP-RIBOSYL)ATION OF p33,AN ACCEPTOR PROTEIN IN HEN LIVER NUCLEI" EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY. 179. 267-273 (1989)
• [文献書誌] M.Shimoyama: "ADP-ribosyltransferase and endogeneous accepter proeins in animal muscle tissues,In:Niacin Nutrition,ADP-ribosylation,and Cancer(M.K.Jacobson and E.L.Jacobson,eds.)" Springer-Verlag, 6 (1989)
• [文献書誌] K.Mishima: "DNA-DEPENDENT MONO(ADP-RIBOSYL)ATION OF p33,AN ENDOGENOUS ACCEPTOR PROTEIN IN HEN LIVER NUCLEI" Elsevier Science Publishers, 4 (1989)