| 研究概要 |
トランスジェニックマウスとラムダファージ試験管内パッケージ法を用いて,哺乳動物生殖細胞/個体レベルで外来遺伝子の安定性を検討しうる系の開発を目指し,以下の実験を行った.
遺伝子マーカーとして選択した大腸菌supF遺伝子はトランスファーRNAの構造遺伝子でありamber変異をサプレスするが、この遺伝子をプラスミドpBR322に組込みさらにこれを、試験管内でパッケージすることが出来るラムダファージEMBL3に導入し多くの組換え体を得、これらの制限酵素地図を作成するとともに、試験管内パッケージの効率の高いものを選択した。組換えファージのsupF遺伝子に生じた突然変異は、適当な大腸菌指示菌(lacZam)を用いてプラークの色の変化として、容易に検出でき、さらに、挿入されている、pBR322を切り出すことにより、変異部分の塩基配列も簡単に決定できる。実際、このファージを、紫外線照射した大腸菌内で増殖させると、線量に依存して突然変異頻度が増加し、突然変異株の塩基配列を決定できた。上記組換えファージDNAをマウス授精卵に導入し、ラムダに含まれるsupFをトランスジーンとして保有するマウス系統をサザン法により選択し、現在までに2系統のトランスジェニックマウス系統を得た。それらのDNAを試験管内パッケージすることにより、マウス細胞で生じたsupFの変化を大腸菌を用いて検出/定量することをこころみ、パッケージの効率や、塩基置換の頻度などに関して、解析を行っている。
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