血液凝固の分子機構の研究

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01637004
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 岩永 貞昭 九州大学, 理学部, 教授 (90029942)
• 研究分担者: 加藤 久雄 国立循環器病センター, 研究所, 室長 (80029959) ; 小林 紀夫 群馬大学, 医学部, 講師 (60008539) ; 森田 隆司 明治薬科大学, 薬学科, 教授 (90128108) ; 松田 道生 自治医科大学, 血液医学研究所, 教授 (50048980)
• キーワード: 血液凝固反応 / 組織因子 / 異常フィブリノーゲン / IX因子 / VII因子 / プロテインCインヒビター / β_2ーグリコプロテイン / 糖鎖ペプチド

研究概要

1:前年度、ウシのIX因子とVII因子の第1EGF様ドメインの中に新しい糖鎖(Xyl)_2ーGlcを見い出したが、引続きヒトIX因子、VII因子、プロテインZ、ウシプロテインZについて、そうした糖鎖の存在を調べた結果、いずれの凝固因子にも含まれることが明らかとなった。さらにウシIX因子由来の糖鎖ペプチドを用いて構造解析を進め、この糖鎖がXylαー1ー3Xylα1ー3ーDーGlcーSer(53)から成るトリサッカリド構造であることを決定した。また、血小板のα顆粒中に含まれるトロンボスポンジンのEGF様ドメインにも、同じ糖鎖のあることを発見した。
2:内因系凝固の開始反応が、血漿中に存在する各種の阻害物質により制御されていことを明らかにしてきたが、今回、ウシ血漿よりこれらの阻害物質を3種類精製し、それらのうち、1つはβ_2ーglycoproteinI、もう1つはプロテインCインヒビターであることを同定した。
3:クサリヘビ毒(RVV)より3種のプロテインCインヒビターA、A'、Bを単離し、それぞれの一次構造を決定した。
4:昨年から本年度にかけて発見された分子異常症患者の血液から凝固因子を分離し、以下に示す構造異常を明らかにした。
i)Fibrinogen Tochigi γ鎖Argー275→Cys置換、ii)Fibrinogen Kyoto I:γ鎖Asnー308→Lys置換、iii)Fibrinogen Saga:γ鎖Argー275→His置換、iv)Fibrinogen Kyoto III:γ鎖Aspー330→Tyr置換、v)Factor IX Kashihara:Valー182→Phe置換、vi)Factor IX Niigata:Alaー390→Val置換、vii)Factor IX Kawachinagano:Argー(ー4)→Gln置換、viii)Factor XII Washington D.C.Cysー571→Ser置換、ix)Factor IX BMーNagoya:Argー180→Trp置換、x)Fibrinogen Osaka II:γ鎖Argー275→Cys置換、xi)Fibrinogen Asahi:γ鎖Metー310→Thr置換。

研究成果

• [文献書誌] Miyata T.: "Fibrinogen Nagoya a Replacement of Glutamine-328 by Arginine in the Υ-Chain That Impairs the Polymerization of Firbin Monomer." J.Biochem.105. 730-735 (1989)
• [文献書誌] Sakai T.: "Blood Clotting Factor IX Kashihara:Amino Acid Substitution of Valine^<182> by Phenylalanine." J.Biochem.105. 756-759 (1989)
• [文献書誌] Miyata T.: "Factor XII Washington D.C.:Inactive Factor XIIa Resulting from Repalacement of Cysteine-571 by Serine." Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,. 86. 8319-8322 (1989)
• [文献書誌] Suehiro K.: "Blood Clotting Factor IX B_M Nagoya:Substitution of Arginine-180 by Tryptophan and Its activation by Chymotrypsin." J.Biol.Chem.264. 21257-21265 (1989)
• [文献書誌] Asakura S.: "A monoclonal antibody that triggers and augments deacylation of an intermedicated thrombin-antithrombin III complex." J.Biol.Chem.264. 13736-13739 (1989)
• [文献書誌] Yamazumi K.: "A methionine-310 to threonine substitution and consequent N-glycosylation:a Υ asparagine-308 identified in a congenital dysfibrinogenemia associated with posttraumatic bleeding,firbinogen Asahi." J.Clin.Invest.83. 1590-1597 (1989)
• [文献書誌] 宮田敏行、岩永貞昭: "組織因子(BIOmedica4巻)" 北隆館, 6 (1989)
• [文献書誌] 徳永文捻、岩永貞昭: "坑リポ多糖因子:その構造と生物活性(26巻)" 中山書店(代謝), 11 (1989)