インヒビンの超微量測定法の開発とその臨床応用

1989 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 01860039
• 研究種目: 試験研究
• 研究機関: 群馬大学
• 研究代表者: 長谷川 喜久 群馬大学, 医学部, 助手 (40092001)
• 研究分担者: 後藤 和文 鹿児島大学, 農学部, 助手 (30162142) ; 福田 正樹 群馬大学, 医学部, 教務員
• キーワード: インヒビン / 測定法 / 卵胞発育 / FSH / ウシ / ヒト

研究概要

1.主な研究対象であるウシのインヒビンを大量に精製するためにウシの卵胞液を収集した。ウシの体外受精を行なっている研究機関と協力し約20リットルの卵胞液を集めることができた。
2.収集した卵胞液をウシインヒビンのモノクロ-ナル抗体を用いたイムノアフィニティ-クロマト、ゲルロカ法、逆相のHPLCとSDS PAGE法により精製した。従来HPLCの段階で既に精製されると考えたが、完全に純化するにはSPS PAGEのステップを入れた方がより完全であった。
3.純化したインヒビンの抗体を作成するために、山羊3頭とウサギ3匹に免疫し抗体を作製している。従来、部分製製のインヒビンを用いて抗体を作製していたが、より特異性の高い測定法の確立のためには、純化したインヒビンの抗体が役立つと考える。
4.ヒトのインヒビンはまだ純化されておらずその実体は不明である。従って今開発しているインヒビンの測定系が確実にヒトのインヒビンを測定できるかどうか判定する方法はない。そこで純化したヒトインヒビンが必要となる。ヒトの卵胞液中のインヒビン活性はウシやブタのそれに比較してわずか数%である。従って常套手段では精製することは不可能である。しかしながら、私共は幸運にも多くのインヒビン抗体を持っている。その中でヒトインヒビンと交差する抗体を用いてイムノアフィニティ-クロマトを確立することができた。このシステムによりヒトインヒビンを500倍に精製することができた。さらにゲルロカ、各種HPLCを用い数万倍に精製することができた。このステップの間に驚くべきことが発見された。つまり免疫活性はあっても生物活性のないインヒビンが大量に存在していることである。ウシにおいても同様なことが発見されており、増々特異性の高い測定系の開発の必要性が増大している。

研究成果

• [文献書誌] Y.Hasegawa,K.Miyamoto,M.Igarashi: "Changes in serum concentrations of immunoreactive inhibin during the oestrous cycle of the rat." Journal Endocrinilogy. 121. 91-100 (1989)
• [文献書誌] Y.Hasegawa,K.Miyamoto,Y.Abe,et al.: "Induction of follicle stimulating hormone receptor by erythroid differentiation factor on rat granulosa cell." Biochemical Biophysical Research Communications. 156. 668-674 (1989)
• [文献書誌] K.Sugino,T.Nakamura,K.Takio,et al.: "Inhibin alpha-subunit monomer is present in bovine follicular fluid." Biochemical Biophysical Research Communications. 159. 1323-1329 (1989)
• [文献書誌] K.Tsuchiya,Y.Hasegawa,M.Seki,et al.: "Correlation of serum inhibinconcentrations with results in an ovarian hyperstimulation program." Fertility & Sterility. 52. 88-94 (1989)
• [文献書誌] T.Hamada,G.Watanabe,T.Kokuho,et al.: "Radioimmunoassay of inhibin in various mammals." Journal Endocrinology. 122. 697-704 (1989)
• [文献書誌] M.Itoh,M.Igarashi,K.Yamada,et al.: "Activin A stimulates meiotic maturation of the rat oocyte in vitro." Biochemical Biophysical Research Communications. 166. 1479-1484 (1990)
• [文献書誌] A.Miyamoto,M.Umezu,S.Ishii,et al.: "Serum inhibin,FSH,LH and testosterone levels and testicular inhibin content in beef bulls from birth to puberty." Animal Reproduction Science. 20. 165-178 (1989)
• [文献書誌] S.Mukai,Y.Mori,H.Nagashima,et al.: "Changes in plasma gonadotropins,ovarian sterois and inhibin concentrations in gilts following progesterone treatment with implantable osmotic pumps." Animal Reproduction Science. 20. 287-297 (1989)
• [文献書誌] K.Okuzawa,Amano,M.Kobayashi: "Differences in salmon GnRH and chicken GnRH-II contents in discrete brain of male and female rainbow trout according to age and of maturity." General Comparative Endocrinology. (1990)
• [文献書誌] Y.Abe,Y.Hasegawa,K.Miyamoto,et al.: "High concentrations of plasma immunoreactive inhibin during the normal pregnancy in women." Journal Clinical Endocrinology and Metabolism. (1990)
• [文献書誌] M.Yamaguchi,K.Miyamoto,Y.Hasegawa,et al.: "Changes of inhibin secretion in the male." Journal Clinical Endoclinology and Metabolism. (1990)
• [文献書誌] M.Ohashi,Y.Hasegawa,M.Igarashi and N.Nawata: "Production of immunoreactive inhibin in a virilizing ovarian Tumor(Sertoli-Lydig tumor)." Clinical Endocrinology.