| 研究課題/領域番号 |
01870021
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| 研究種目 |
試験研究(B)
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
菅村 和夫 東北大学, 医学部, 教授 (20117360)
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| 研究分担者 |
白石 広行 宮城県保健環境センター, 主任研究員
岡村 州博 東北大学, 医学部附属病院, 講師 (90124560)
佐々木 毅 東北大学, 医学部附属病院, 助教授 (50110656)
中村 正孝 東北大学, 医学部, 講師 (30180392)
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| キーワード | ヒトパルボウイルス / B19 / VPー1 / PCR / ELISA |
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| 研究概要 |
血清中のヒトパルボウイルス(HPV/B19)粒子からDNAを抽出し、このDNAからPCR法によってVPー1遺伝子を単離した。VPー1遺伝子をpUC19ベクタ-に挿入し、大腸菌で組み換えVPー1抗原を発現させた。菌体を可溶化後DE52カラムにてVPー1抗原を部分精製した。この抗原にはVPー1とVPー2に相当するウイルス抗原が含まれていた。組み換えVPー1抗原をマイクロプレ-トに吸着させ、このプレ-トに希釈した被検血清を加え、さらに牛アルブミン加PBSで洗浄後ペルオキシダ-ゼ標識抗ヒトIgM抗体を加える。その後OPD試薬を加えて、492nmの吸光度を測定する。上記組み換えVPー1抗原を用いたELISAキットと血清中から精製したHPV/B19抗原を用いたELISAキットとを比較検討した。先ず、HPV/B19初感染者の血清について経時的に検索したところ、両キット間で一致した。さらに、献血者300名について組み換え抗原キットを用いて検索したところ、精製抗原キットでの検索結果と類似した結果が得られた。これらの結果から組み換えVPー1抗原を用いたELISAキットが抗VPー1IgM抗体測定用として利用され得ることが分かった。次に、VPー1遺伝子の5'端571ー590、3'端1083ー1102、をそれぞれプライマ-とし、VPー1遺伝子をプロ-ブとしたPCR法を確立した。その結果、ここで用いたPCR法の感度は10コピ-以下であることが分かった。このPCR法を用いてHPV/B19初感染者の血清中ウイルス遺伝子を検索したところ、従来のサザン法では検出できなかった感染初期の血清中にHPV/B19DNAを検出した。さらに、血清中HPV/B19DNAが発症から2ヶ月間以上の長期にわたり観察される症例が存在した。このような症例では症状(発熱、関節痛等)も比較的長期間持続することが分かった。
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