| 研究課題/領域番号 |
01870114
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| 研究種目 |
試験研究(B)
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
上田 國寛 京都大学, 医学部・臨床検査医学, 助教授 (00027070)
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| 研究分担者 |
吉村 学 京都府立医科大学, 臨床検査医学, 教授 (40094453)
遠藤 治郎 島根医科大学, 検査部, 教授 (20026892)
戸谷 誠之 国立健康栄養研究所, 部長 (70163988)
田畑 勝好 京都大学医療技術短期大学部, 助教授 (70115880)
神奈木 玲児 京都大学医学部, 臨床検査医学, 講師 (80161389)
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| キーワード | カルパスタチン / カルパイン / モノクロ-ナル抗体 / ELISA / 繰り返しドメイン / リン酸化 / リンパ球 / HTLVーI |
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| 研究概要 |
1.カルパスタチンの酵素免疫定量法の確立ーヒトのカルパスタチン(カルパインの内因性インヒビタ-)に対するモノクロ-ナル抗体数種を作製し、その組合せによるELISA(enzymeーlinked immuneーSorbent assay)測定法を確立した。この一部を、某社の協力により、サンドイッチイムノアッセイキットとして製品化した。
2.カルパインの酵素免疫定量法の開発ー同相にカルパインIおよびIIに対するモノクロ-ナル抗体を作製し、ELISA測定法を開発した。
3.カルパスタチンの分子遺伝学的構造解析ー先年クロ-ニングによって解明したー次構造に基き、4回繰り返されるドメイン中の中央保存配列のさらに一部を化学合成し、あるいはcDNA断片として大腸菌に導入・発現させ、18アミノ酸の領域が最小機能単位であることを明らかにした。
4.カルパスタチンのリン酸化の解析ースルパスタチンが細胞内でリン酸化を受けること、また、リン酸化に伴って細胞内局在が変わることを見出した。
5.ヒトの造血系細胞におけるカルパインーカルパスタチン系の解析ー培養リンパ球系細胞におけるカルパインおよびカルパスタチンの発現をmRNA、タン白質、酵素活性の各レベルで解析した結果、HTLVーI感染によりカルパインIIとカルパスタチンの発現が著明に増加することを見出した。
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