| 研究課題/領域番号 |
02044053
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| 研究機関 | 東京工業大学 |
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研究代表者 |
星 元紀 東京工業大学, 生命理工学部, 教授 (20012411)
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| 研究分担者 |
PINTO M.Rosa 国立酵素タンパク質化学研究所, 研究員
MARINO Rita 国家研究評義会(CNR), 研究員
DALE Brian 国立ナポリ臨海実験所, 主任研究員
DESANTIS Ros 国立ナポリ臨海実験所, 部長
千葉 和義 東京工業大学, 生命理工学部, 助手 (70222130)
松本 緑 東京工業大学, 生命理工学部, 助手 (00211574)
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| キーワード | ホヤ / 精子・卵相互作用 / 自家不稔性 / 濾胞細胞 / ライシン / プロテア-ゼ / αーLーフコシダ- / rDNA |
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| 研究概要 |
本年度得た主な知見、成果は以下の通りである。
1.マボヤでは、卵巣より得た一次卵母細胞を海水中で培養すると、先ずテスト細胞が分離し、ついで卵核胞が崩壊するが、受精能はない。さらに培養を続けると、自家、他家の区別無く受精可能となり、やがてさらに数時間たつと初めて自家不稔性となる。しかし、培養開始前に濾胞細胞を除いておくと、自家不稔性にならない。カタユウレイボヤでは、これらの変化は遥かに早く起り、培養開始後3時間の内に自家不稔性が完成する。
2.ユウレイボヤ精子の卵外被通過のためのライシン活性がプロテア-ゼの合成基質SucーAlaーAlaーPheーAMCにより最も阻害されることなどからキモトリプシン様のプロテア-ゼであると考えられる。
3.マボヤ精子αーLーフコシダ-ゼの至適pHは正常海水よりもかなり低い。精子と卵を結合させた後、海水のpHを同酵素の至適値にまで下げると、ほとんどの精子が遊離した。また卵にウシのαーLーフコシダ-ゼを反応させ、卵黄膜のフコ-ス残基をはずすと精子との結合能は低下した。さらにフコシダ-ゼの強力な阻害剤により、精子と卵の結合が阻害されるた。以上より、ユウレイボヤト同様マボヤでも精子表面のαーLーフコシダ-ゼが卵黄膜糖鎖を認識して結合する可能性が支持された。
4.マボヤ卵黄膜の主要成分60kGPについて精製、アミノ酸分析を行ったところ、この糖タンパク質は、プロリンに富み、疎水性アミノ酸を多く含むことが分かった。
5.ユウレイボヤの実験動物化のために、系統作製の遺伝子マ-カ-としてrDNAをクロ-ニングし、その主要部分の塩基配列を決定した。
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